[發明專利]強冬性白菜型冬油菜丙二醛MDA分子標記及QTL定位

有效

• 申請號: 201510217076.4
• 申請日: 2015-04-29
• 公開（公告）號: CN104877994B
• 公開（公告）日: 2019-06-25
• 發明（設計）人: 孫萬倉;楊剛;劉自剛;曾秀存;武軍艷;方彥;李學才;孔德晶;楊建勝;張樹娟
• 申請（專利權）人: 甘肅農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6895
• 代理公司: 甘肅省知識產權事務中心 62100
• 代理人: 孫惠娜

本發明公開了強冬性白菜型冬油菜丙二醛MDA分子標記及QTL位點，其篩選步驟包括：（1）利用多代套袋自交的親本強冬性超強抗寒冬油菜‘隴油7號’和強抗寒冬油菜‘隴油9號’雜交構建F2代分離群體；（2）采用CTAB法提取兩親本及F2代分離群體的葉片DNA；（3）利用SSR和InDel引物對兩親本DNA進行多態性引物篩選；（5）通過F2分離群體獲得基因型數據構建遺傳連鎖圖和QTL分析；（6）獲得了2強冬性白菜型冬油菜丙二醛MDA的QTL位點，分別命名為Qmda.gsau?1A和Qmda.gsau?8A；與2強冬性白菜型冬油菜丙二醛MDA的QTL位點連鎖的4個分子標記分別為：BrID101211、OI12F11(R1)、BrID10839和Ra2?E12。

技術領域

本發明屬于分子生物學及遺傳育種技術領域，具體涉及一種強冬性白菜型冬油菜丙二醛MDA基因QTL位點，同時還涉及與強冬性白菜型冬油菜丙二醛MDA基因QTL位點連鎖的分子標記。

背景技術

白菜型油菜在我國栽培歷史悠久，種質資源豐富，是我國重要的油料作物之一。但白菜型油菜以春性為主，冬性白菜型冬油菜種質缺乏，尤其適宜北方旱寒區種植的強冬性冬油菜品種缺乏。我國北方氣候嚴寒，冬油菜具備優異的抗寒性才能安全越冬，因此抗寒品種選育是北方冬油菜發展的關鍵。采用常規育種方法選育抗寒材料費時費力，且選擇效率較低，如果借助分子標記輔助育種，可以在苗期進行淘汰，不僅節約生產成本而且大大提高選擇效率。

丙二醛MDA是植物膜脂過氧化最重要的產物之一，它的產生能加劇膜的損傷因此在植物抗寒生理研究中丙二醛MDA含量是一個常用指標。關于丙二醛MDA在植物體內變化的研究甚多，但對其分子標記及QTL定位的研究尚未見報道。本研究通過QTL定位，旨在篩選出強冬性白菜型冬油菜丙二醛MDA的QTL位點和分子標記，用于強冬性白菜型冬油菜丙二醛MDA基因的克隆和冬油菜抗寒育種的分子標記輔助選擇。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術中的缺點而提供了2個強冬性白菜型冬油菜丙二醛MDA的QTL位點，該2個位點的效應值都比較高，對強冬性白菜型冬油菜丙二醛MDA含量調控起著重要作用，可用作定位克隆和分子標記輔助選擇。

本發明還提供4個與強冬性白菜型冬油菜油丙二醛MDA的QTL位點連鎖的分子標記，這些標記與QTL位點的遺傳距離較近且是基于 PCR 技術的SSR和InDel標記，因而可靠且使用方便，將對強冬性白菜型冬油菜抗寒育種提供便利。

為解決本發明的技術問題采用如下技術方案：

強冬性白菜型冬油菜丙二醛MDA分子標記及QTL位點，其篩選包括有以下步驟：

（1）構建分離群體：利用多代套袋自交的親本強冬性超強抗寒冬油菜‘隴油7號’和強抗寒冬油菜‘隴油9號’配置雜交組合,雜交F1代自交產生F2代分離群體。本發明用到的實驗材料由甘肅農業大學油菜遺傳育種課題組提供。

（2）油菜葉片DNA提取：采用CTAB法提取親本‘隴油7號’和 ‘隴油9號’及F2代分離群體的葉片DNA。

（3）引物來源及合成：由上海生物工程技術有限公司合成315對引物，引物來源于www.UK crop.net發表的油菜微衛星引物序列以及Brassica Database網站http://brassicadb.org/上公布的10個染色體上的所有引物，其中SSR引物51對，InDel 引物264對。

（4）多態性引物篩選：利用合成的引物對兩親本DNA進行PCR擴增，篩選出具有多態性的引物，該過程涉及PCR擴增、聚丙烯酰胺凝膠電泳、銀染、照相等步驟。

（5）多態性引物在F2代檢測：將篩選出的多態性引物在F2代中進行檢測，獲得基因型數據，該過程與（4）步驟基本相同。