[發(fā)明專利]CD248+CD8+T細胞亞群在人升主動脈瘤病變過程中的作用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510215904.0
• 申請日: 2015-05-28
• 公開（公告）號: CN104931697B
• 公開（公告）日: 2017-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李軍;胡曉娟;伍婷
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;A61K35/17;A61K38/17;A61P35/00;A61P35/04
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司31001
• 代理人: 翁若瑩

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種新的細胞亞群在人升主動脈瘤病變過程中的作用。屬于生物醫(yī)藥，細胞生物學(xué)，心臟大血管外科領(lǐng)域。

背景技術(shù)

胸主動脈瘤是指胸部主動脈部分異常擴張，變形，呈瘤樣突出，可發(fā)生在主動脈根部、升主動脈、主動脈弓或降主動脈等部位。本病早期多無癥狀和體征，后期瘤體增大后壓迫周圍組織出現(xiàn)癥狀，瘤體一旦破裂，十分危重，死亡率高。胸主動脈瘤的發(fā)病機制非常復(fù)雜，除染色體缺陷所致的馬凡氏綜合征之外，可能涉及血流動力學(xué)變化、透壁炎癥反應(yīng)等，但具體發(fā)病機制尚無定論。目前研究表明，升主動脈瘤(ATAA)的病理學(xué)特征主要有血管增生、慢性炎癥以及細胞外基質(zhì)的退化幾方面。

CD248又名內(nèi)皮唾液酸蛋白，也被稱為腫瘤內(nèi)皮標志物-1(tumor?endothelial?marker-1)，是一種跨膜糖蛋白，在周細胞、成纖維細胞表面廣泛表達，在炎性區(qū)域以及腫瘤新生血管中表達水平較高。已有文獻指出，CD248在人類大部分腫瘤血管內(nèi)皮表面都有所表達，但在正常組織血管內(nèi)皮不表達。升主動脈瘤的病理過程涉及血管的增生，但目前尚無關(guān)于CD248在升主動脈瘤中作用的研究。

本發(fā)明首先闡明了CD248在對照組和主動脈瘤組中外周血和組織局部的表達差異，并將CD248定位于CD8+T細胞上，即發(fā)揮作用的主要是CD248+CD8+T細胞亞群。通過體外實驗證明，該亞群細胞可以通過降低炎性反應(yīng)，抑制內(nèi)皮細胞遷移減輕升主動脈瘤的病變進程。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供CD248作為主動脈瘤診斷標志物的作用。

本發(fā)明的另一個目的在于提供一種新的細胞亞群即CD248+CD8+T細胞亞群在人主動脈瘤病變中的潛在保護作用。

為了達到上述目的，本發(fā)明提供了CD248在制備用于診斷主動脈瘤的制劑或試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了一種用于診斷主動脈瘤的試劑盒，其特征在于，包括用于檢測CD248含量的試劑。所述的用于檢測CD248含量的試劑為抗人CD248抗體以及抗人CD248?ELISA試劑盒中的至少一種。

優(yōu)選地，所述的用于檢測CD248含量為檢測外周血或主動脈血管壁中CD248含量。

本發(fā)明還提供了一種CD248+CD8+T細胞亞群，其特征在于，其制備方法包括：收集健康人的外周血，用ficoll分離液，采用密度梯度離心法分離得到單個核細胞，用PBS緩沖液以及staining?buffer洗滌，再用1％BSA溶液封閉，加入兔抗人CD248抗體，4℃孵育30mins，洗滌后，加入抗兔647熒光二抗以及抗人CD8-FITC流式抗體和抗人CD3-PE流式抗體，4℃避光孵育30mins后洗滌、重懸后上機，用流式分選儀分別收集CD248+CD8+T細胞亞群以及CD248-CD8+T細胞亞群。

本發(fā)明還提供了CD248+CD8+T細胞亞群在制備用于治療主動脈瘤的制劑或試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了一種用于治療主動脈瘤的制劑或試劑盒，其特征在于，包含CD248+CD8+T細胞亞群。

本發(fā)明中所述的與對照組相比，CD248在主動脈瘤患者外周血中表達降低，組織局部表達升高，通過以下方法檢測：(1)取對照組和主動脈瘤組患者外周血，分離出外周血單個核細胞，用流式細胞儀檢測CD248表達量差異。(2)取對照組主動脈壁和主動脈瘤病灶區(qū)血管壁，提取RNA后PCR測定CD248表達量差異。

本發(fā)明所述的CD248+CD8+T細胞在人主動脈瘤病變中的潛在保護作用，通過下述步驟證明：(1)用流式細胞分選法，從對照組外周血單個核細胞中分選出CD248+CD8+T細胞與CD248-CD8+T細胞，將這兩群細胞提取RNA，PCR分別檢測促炎因子IF-1β，IFN-γ的表達，抑炎因子IL-10的表達。(2)將(1)中分選出的兩群細胞分別與人主動脈內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)。將共培養(yǎng)后的內(nèi)皮細胞提取RNA，用PCR測定內(nèi)皮標志物CD31以及炎性因子ICAM1、VCAM1的表達。(3)按照(2)中方案共培養(yǎng)，共培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞進行劃痕實驗，測定共培養(yǎng)前、后內(nèi)皮細胞遷移的距離。

本發(fā)明所述的健康人指的是非主動脈瘤患者。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：