[發明專利]一種耐阿霉素U87細胞模型及其應用

在審

• 申請號: 201510215901.7
• 申請日: 2015-04-30
• 公開（公告）號: CN104946593A
• 公開（公告）日: 2015-09-30
• 發明（設計）人: 邵一葉;陳英輝
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬金山醫院
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12Q1/02
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 馬偉

技術領域

本發明涉及細胞模型的建立，具體地說，涉及一種耐阿霉素U87細胞模型及其應用。

背景技術

腦膠質瘤是由于大腦和脊髓膠質細胞癌變所產生的、最常見的原發性顱腦腫瘤。年發病率約為3-8人/10萬人口。如同其他腫瘤(疾病)一樣，膠質瘤也是由于先天的遺傳高危因素和環境的致癌因素相互作用所導致的。一些已知的遺傳疾病，例如神經纖維瘤病(I型)以及結核性硬化疾病等，為腦膠質瘤的遺傳易感因素。

化療藥物阿霉素(DOX)通過細胞內途徑促進腫瘤細胞凋亡，常用于腦膠質瘤的治療，但易發生耐藥，而耐藥后再化療效果很差。普通腦膠質瘤細胞株在研究腦膠質瘤耐藥機制中存在局限性，而腦膠質瘤耐藥細胞株更能從分子生物學角度來研究其耐藥機制，有助于進一步尋找腦膠質瘤耐藥后的治療方法。同時，腦膠質瘤等腫瘤也可導致癲癇發作，導致難治性癲癇，腦膠質瘤耐藥細胞株也可用于難治性癲癇耐藥的研究。

中國期刊《中華神經外科雜志》2009年4月第25卷第4期，刊出的論文“人神經膠質瘤耐阿霉素細胞株的建立及其耐藥機制的初步研究”，選用常用的化療藥物阿霉素和人惡性膠質母細胞瘤細胞株SHG44為研究對象，用ADM濃度梯度遞增結合間歇誘導法建立多藥耐藥的神經膠質瘤細胞株SHG44/ADM，并對SHG44/ADM的耐藥特性及機制進行了初步研究，其建立的人神經膠質瘤耐藥細胞株SHG44/ADM通過藥敏實驗表明對ADM的IC50為17.83±0.52，耐藥指數為10.7，凍存3個月、復蘇后對ADM耐藥指數為10.5，對耐藥的穩定性無明顯影響。

中國期刊《中國臨床神經外科雜志》2014年02期，刊出的論文“膠質瘤多藥耐藥細胞株U251/TMZ的生物學特性”，探討了膠質瘤U25/替莫唑胺(TMZ)多藥耐藥細胞株的生物學特性，采用TMZ間歇濃度梯度遞增法誘導建立膠質瘤多藥耐藥細胞株U251/TMZ，光鏡觀察細胞形態，細胞計數計算倍增時間，四甲基偶氮唑藍法檢測耐藥指數，流式細胞儀檢測細胞周期，逆轉錄-PCR法檢測多藥耐藥性1(MDR1)、Bcl-2、多藥耐藥相關蛋白5(MRP5)、肺耐藥相關?蛋白1(LRP1)等mRNA表達，結果膠質瘤耐藥細胞株U251/TMZ對TMZ、依托泊苷、硫酸長春新堿、環磷酰胺、阿霉素的耐藥指數分別為4.39、3.61、2.64、2.00、1.63。

U87細胞是人腦膠質瘤細胞系，被用于人腦膠質瘤病理機制的研究，以及人腦膠質瘤藥物的篩選等。目前還未見耐阿霉素U87細胞模型的相關報道。而建立更多的耐藥細胞模型對于探討人腦膠質瘤耐藥產生原因及其機制，進一步指導對人腦膠質瘤的治療具有重要意義。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種耐阿霉素U87細胞模型。

本發明的再一的目的是，提供所述的耐阿霉素U87細胞模型的用途。

本發明的第三個目的是，提供所述的耐阿霉素U87細胞模型的建立方法。

為實現上述第一個目的，本發明采取的技術方案是：

一種耐阿霉素U87細胞模型，所述的耐阿霉素U87細胞模型的保藏號為CCTCC?C201531。

為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是：

所述的耐阿霉素U87細胞模型的用途，用于研究腦膠質瘤耐藥機制、尋找腦膠質瘤耐藥逆轉的靶點、篩選治療腦膠質瘤或解除腦膠質瘤耐藥的藥物。

所述的耐阿霉素U87細胞模型的用途，用于腦膠質瘤引起的難治性癲癇的機制研究、尋找腦膠質瘤引起的癲癇的耐藥逆轉靶點、篩選治療腦膠質瘤引起的癲癇或解除腦膠質瘤引起的癲癇耐藥的藥物。

為實現上述第三個目的，本發明采取的技術方案是：

所述的耐阿霉素U87細胞模型的建立方法，它包括以下步驟：

a)培養U87細胞；

b)U87細胞用阿霉素開始干預，然后換無阿霉素培養基，至細胞生長恢復正常即細胞穩定生長、形態飽滿、無漂浮死細胞、傳代密度為30％的情況下3至5天可長至90％后再開始正常傳代并提高阿霉素的濃度，每次阿霉素的干預時間均為24小時；

c)對干預后的U87細胞進行檢測，獲得耐阿霉素U87細胞模型。?

本發明優點在于：