[發明專利]一種垂體后葉激素的純化方法

有效

• 申請號: 201510215900.2
• 申請日: 2015-04-30
• 公開（公告）號: CN104829694B
• 公開（公告）日: 2018-12-11
• 發明（設計）人: 黃臻輝;江文濤;汪雅雯;丁金國
• 申請（專利權）人: 上海上藥第一生化藥業有限公司
• 主分類號: C07K7/16
• 分類號: C07K7/16;C07K1/34
• 代理公司: 上海容慧專利代理事務所(普通合伙) 31287
• 代理人: 于曉菁

本發明公開了一種垂體后葉激素的純化方法。該方法包括下述步驟：(1)將垂體后葉激素原液與緩沖液混合，所述的緩沖液的pH值為3.0～5.0；(2)采用超濾膜進行超濾，收集截留液；(3)將截留液用水稀釋，加入酸調節溶液pH值至1.0～2.0；(4)采用超濾膜進行反超濾，收集超出液，即可。本發明的純化方法能夠有效去除垂體后葉激素中高分子有關物質，該純化方法生產周期短，制得的產品純度高，生產成本低，易于放大生產。

技術領域

本發明涉及蛋白質純化領域，具體涉及一種垂體后葉激素的純化方法。

背景技術

垂體后葉激素，是由腦垂體后葉中提取的一種混合類多肽激素，主要包含加壓素和縮宮素兩種主要成分。加壓素由九個氨基酸組成，因含有兩個半胱氨酸，所以又稱八肽。加壓素具有抗利尿和升高血壓兩種作用，因此也稱為抗利尿激素。縮宮素也由九個氨基酸組成，因其對平滑肌有刺激作用，能使子宮平滑肌收縮，具有催產作用，故又稱催產素。

現有技術在生物大分子活性物質分離純化過程中，為了去除分子量較大的有關物質，目前主要采用透析、凝膠層析或超濾技術。在垂體后葉激素粗提液中一部分有關物質會與垂體后葉激素凝聚，另一部分有關物質又保持與垂體后葉激素分離，同時垂體后葉激素自身也會形成多聚體。若采用透析技術純化垂體后葉激素會使原液稀釋，同時收率較低，生產周期長；采用凝膠層析技術則載量小，生產成本高，操作技術要求高，對與有關物質結合的垂體后葉激素不能徹底分離，影響收率。采用超濾時，大部分垂體后葉激素并不能透過超濾膜，而是與有關物質一起存在于截留液，不能有效除去有關物質。

發明內容

本發明所解決的技術問題在于為了克服現有技術中垂體后葉激素純化收率低、與有關物質不能徹底分離的缺陷，提供一種垂體后葉激素的純化方法。本發明的純化方法能夠有效去除垂體后葉激素中高分子有關物質，該純化方法生產周期短，制得的產品純度高，生產成本低，易于放大生產。

本發明是通過以下技術方案解決上述技術問題的：

本發明提供了一種垂體后葉激素的純化方法，其包括下述步驟：

(1)將垂體后葉激素原液與緩沖液混合，所述的緩沖液的pH值為3.0～5.0；

(2)采用超濾膜進行超濾，收集截留液；

(3)將截留液用水稀釋，加入酸調節溶液pH值至1.0～2.0；

(4)采用超濾膜進行反超濾，收集超出液，即可。

其中，所述的垂體后葉激素原液可為本領域常規使用的各種垂體后葉激素原液，較佳地通過下述步驟制得：腦垂體丙酮浸泡→剝取后葉丙酮浸泡→干燥→粉碎→丙酮處理→干燥→粉碎→酸提取→活性炭脫色→過濾→得垂體后葉激素原液，本發明優選購于上海第一生化藥業有限公司的垂體后葉激素原液。

其中，步驟(1)中所述的緩沖液較佳地為醋酸鈉-醋酸緩沖液或醋酸銨-醋酸緩沖液。

其中，所述的垂體后葉激素原液與緩沖液的體積比較佳地為(0.5～5)：1。步驟(1)中，所述的緩沖液的濃度較佳地為10mmol/L～100mmol/L。

其中，步驟(2)中，所述的超濾膜較佳地為截留相對分子量為2kDa的超濾膜，優選來源于德國賽多利斯公司的Hydrosart超濾膜。

其中，步驟(3)中，所述的酸較佳地為鹽酸、硫酸和磷酸中的一種或多種。

步驟(4)中，所述的超濾膜較佳地為截留相對分子量為5kDa的超濾膜，優選來源于德國賽多利斯公司的Hydrosart超濾膜。

其中，步驟(2)中，超濾的時間較佳地以超出液體積達到垂體后葉激素超濾起始體積的70％～90％時為止。

其中，步驟(4)中，反超濾的時間較佳地以超出液體積達到垂體后葉激素反超濾起始體積的70％～90％時為止。