[發(fā)明專(zhuān)利]一種鹽酸黃酮哌酯的熒光測(cè)定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510215149.6
• 申請(qǐng)日: 2015-04-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104777142B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-01-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李文紅;魏永巨;李樹(shù)山;郭立達(dá);呂芳
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 河北工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/64
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 石家莊冀科專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司13108
• 代理人: 馬世敏

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及藥物分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種黃酮類(lèi)藥物含量的測(cè)定方法。

背景技術(shù)

鹽酸黃酮哌酯（3-甲基黃酮-8-羧酸乙哌啶基酯鹽酸鹽，F(xiàn)lavoxate hydrochloride，F(xiàn)X）屬于黃酮類(lèi)化合物，是一種平滑肌松弛藥，對(duì)泌尿生殖系統(tǒng)的平滑肌有選擇性的解痙作用，臨床上以片劑或膠囊的形式用于治療各種下尿路感染或梗阻性疾病，可以消除尿頻、尿急、尿失禁及尿道膀胱平滑肌痙攣引起的下腹部疼痛。藥代動(dòng)力學(xué)研究表明，F(xiàn)X在靜脈給藥或口服給藥時(shí)，在體內(nèi)迅速吸收并代謝成3-甲基黃酮-8-羧酸（MFA），從尿中排出。定量分析FX及其代謝產(chǎn)物MFA在藥劑、血液、尿液等樣品中的方法有很多種，包括紫外分光光度法、高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳法、熒光分析法和膜電位法等。其中對(duì)于鹽酸黃酮哌酯片劑比較普遍的分析方法是2010版藥典紫外分光光度法，將藥物片劑研磨后用鹽酸溶液溶解，利用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定293 nm波長(zhǎng)下的吸光度，對(duì)照標(biāo)品計(jì)算出藥物含量。由于鹽酸黃酮哌酯在此波長(zhǎng)下的紫外吸收強(qiáng)度弱，因此該方法所需藥物濃度為20μg/mL，藥物樣品消耗量大。而高效液相色譜法，分析檢測(cè)速度慢，藥品及溶劑消耗量大。

熒光分析法具有靈敏度高、分析速度快、手續(xù)簡(jiǎn)便和環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)，在藥物分析中的應(yīng)用已有不少研究報(bào)道。但是，黃酮類(lèi)化合物的內(nèi)源熒光普遍不強(qiáng)，有應(yīng)用價(jià)值的熒光分析方法不多。2015年，埃及人Zaazaa等報(bào)道了尿液中FX代謝產(chǎn)物MFA的熒光分析方法，并用于泌尿靈片劑中FX的測(cè)定。此方法將FX在堿性條件下水解，然后用HCl調(diào)節(jié)pH至中性，蒸干溶液，再用甲醇溶解殘留物后測(cè)定熒光，MFA甲醇溶液的熒光峰位于λ_ex / λ_em= 338 / 390 nm。由于MFA本身熒光強(qiáng)度較弱，表面活性劑也不能敏化該化合物，因此MFA甲醇溶液的測(cè)試濃度是4 μg/mL，且測(cè)定靈敏度不高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服已有技術(shù)之缺陷，提供一種鹽酸黃酮哌酯的熒光測(cè)定方法，將鹽酸黃酮哌酯在堿性條件下水解，利用熒光法測(cè)定其含量，具有靈敏度高、操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。

本發(fā)明所述技術(shù)問(wèn)題是以下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種鹽酸黃酮哌酯的熒光測(cè)定方法，所述方法包括如下步驟：

a、制備樣品溶液

將鹽酸黃酮哌酯片研碎用甲醇浸泡，提取上清液，用甲醇稀釋成樣品溶液，所述樣品溶液的濃度為0.05 - 0.01mg/ml；

b、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

配制不同濃度的FX標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度范圍為0.020-0.500μg/mL；將FX標(biāo)準(zhǔn)溶液在強(qiáng)堿性環(huán)境下沸水浴加熱，冷卻后使用熒光分光光度計(jì)掃描熒光光譜，測(cè)量λ_ex / λ_em= 302 / 410 nm的熒光強(qiáng)度I_F，以熒光強(qiáng)度值I_F與鹽酸黃酮哌酯的濃度c作標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，得出兩者的回歸方程；

c、測(cè)定樣品濃度

將步驟a制得的樣品溶液用去離子水稀釋至濃度為0.1-1.0μg/mL，將稀釋后的樣品溶液中在強(qiáng)堿性環(huán)境下沸水浴中加熱，冷卻后使用熒光分光光度計(jì)掃描熒光光譜，測(cè)量λ_ex / λ_em= 302 / 410 nm的熒光強(qiáng)度為I_F，利用回歸方程計(jì)算鹽酸黃酮哌酯片樣品溶液中FX的濃度。

上述鹽酸黃酮哌酯的熒光測(cè)定方法，步驟b和步驟c中所述強(qiáng)堿性環(huán)境為在溶液中加入2.0 mL 1.0 mol/L的NaOH溶液，溶液的pH值大于13.0。

上述鹽酸黃酮哌酯的熒光測(cè)定方法，所述沸水浴中加熱的時(shí)間為大于等于2小時(shí)。

上述鹽酸黃酮哌酯的熒光測(cè)定方法，步驟b和步驟c中沸水浴加熱的溶液經(jīng)冷卻至室溫后測(cè)定熒光光譜。

上述鹽酸黃酮哌酯的熒光測(cè)定方法，步驟c中所述稀釋后樣品溶液中的甲醇含量≤10%。