[發明專利]基于褐飛虱蜜露的轉基因抗除草劑水稻安全性的評價方法

有效

• 申請號: 201510214497.1
• 申請日: 2015-04-29
• 公開（公告）號: CN104798616B
• 公開（公告）日: 2017-03-22
• 發明（設計）人: 蔣顯斌;龍麗萍;黃芊;凌炎;陳玉沖
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區農業科學院水稻研究所
• 主分類號: A01G7/00
• 分類號: A01G7/00;A01G16/00;A01K67/033
• 代理公司: 深圳市科吉華烽知識產權事務所(普通合伙)44248
• 代理人: 胡吉科

技術領域

本發明屬于轉基因作物生態風險評價技術領域，具體涉及基于褐飛虱蜜露的轉基因抗除草劑水稻安全性的評價方法，特別是基于褐飛虱蜜露的轉基因抗除草劑水稻對捕食性天敵黑肩綠盲蝽安全性評價方法。

背景技術

褐飛虱Nilaparvata?lugens?(St?l)（Brown?planthopper，簡稱BPH）是我國及許多亞洲國家當前水稻生產上的首要害蟲。褐飛虱取食水稻后會排泄蜜露，蜜露排泄的多少與取食量成正比，取食越多，排泄的蜜露也相應增多，因此，褐飛虱蜜露排泄量常作為其對水稻致害性的指標，現也廣泛應用于施用農藥、肥料后，或氣候變化后褐飛虱與水稻的互作關系研究上。

黑肩綠盲蝽Cyrtorhinus?lividipennis?Reuter是水稻害蟲褐飛虱的重要天敵，在控制褐飛虱自然種群數量上發揮了很大作用?，F有關轉基因水稻對黑肩綠盲蝽的安全性評價的研究主要是在基因傳遞上和對黑肩綠盲蝽生物學特性的影響上，如轉Bt（Bacillus?thuringiensis，蘇云金桿菌）基因水稻被褐飛虱取食后，黑肩綠盲蝽又取食褐飛虱卵，Bt基因在這一食物鏈中的傳遞；又如褐飛虱先取食轉基因水稻，黑肩綠盲蝽再捕食在轉基因水稻上生長發育的褐飛虱所產的卵，從而研究轉基因水稻對黑肩綠盲蝽生物學特性的影響?，F有資料中收集褐飛虱蜜露的是用膜將褐飛虱套在稻桿上，過一段時間再收集，每次收集到的蜜露很少，需在多根稻桿上套上膜，再將收集到的蜜露匯集，工序繁瑣、效率低；另一方面，膜內常常有水蒸氣，容易影響所收集的蜜露的純度；稻桿豎著放置，收集的蜜露也容易漏出來。

褐飛虱取食水稻后，排泄的蜜露富含多種營養物質，天敵昆蟲會取食褐飛虱蜜露，但是褐飛虱取食轉基因水稻后分泌的蜜露對捕食性天敵黑肩綠盲蝽安全性評價，對于轉基因抗除草劑水稻環境釋放的生態風險評估也非常重要，目前還未見此類報道。

發明內容

本發明針對上述現狀，提供了一種基于褐飛虱蜜露的轉基因抗除草劑水稻安全性的評價方法，對黑肩綠盲蝽直接取食褐飛虱取食轉基因水稻后分泌的蜜露對黑肩綠盲蝽壽命和捕食能力等方面的影響進行評價，從而更全面、科學的評價抗除草劑轉基因水稻的生態安全性。

對此，本發明提供了一種基于褐飛虱蜜露的轉基因抗除草劑水稻的環境安全性評價方法，包括以下步驟：

步驟S1：確定比較樣本的水稻品種得到各比較樣本，分別收集所述各比較樣本水稻上飼養的褐飛虱分泌的蜜露，得到各比較樣本水稻的褐飛虱蜜露；

步驟S2：用載體分別吸收比較樣本水稻的褐飛虱蜜露，然后將吸收了褐飛虱蜜露的載體分別裝入喂食容器中得到各比較樣本褐飛虱蜜露的喂食容器，所述喂食容器的側壁設有通孔；準備與樣本數量相同的試驗箱，將所述各比較樣本褐飛虱蜜露的喂食容器分別放入各試驗箱中；

步驟S3：將24?h內羽化的黑肩綠盲蝽成蟲分別裝入到所述步驟S2裝有比較樣本褐飛虱蜜露喂食容器的各試驗箱中，定時檢查黑肩綠盲蝽成蟲的存活數，直到成蟲死亡；

步驟S4：準備帶有褐飛虱卵的各比較樣本的水稻稻莖；將帶有褐飛虱卵的各比較樣本的水稻稻莖放入到所述步驟S2裝有對應的比較樣本褐飛虱蜜露喂食容器的各試驗箱中，將24?h內羽化的黑肩綠盲蝽雌成蟲也裝入到所述各試驗箱中，24h后，解剖稻株，得到褐飛虱卵被黑肩綠盲蝽捕食的數量；

步驟S5：分析比較取食了各比較樣本褐飛虱蜜露的黑肩綠盲蝽的成蟲壽命，以及褐飛虱卵捕食量的差異顯著性，分析轉基因抗除草劑水稻對黑肩綠盲蝽生物學特性和捕食能力的影響。

上述技術方案，將載體裝入帶孔的喂食容器內，可以避免蟲與載體直接接觸，減少了影響因素。如果用載體吸收稻株傷流液直接來喂蟲子，蟲子接觸液體的面積大，容易沾濕翅膀、身體，影響實驗效果。

作為本發明的進一步改進，所述比較樣本水稻品種為三個，分別為轉基因抗除草劑水稻、非轉基因親本對照水稻和非轉基因感蟲對照水稻。

作為本發明的進一步改進，所述步驟S1中收集褐飛虱蜜露的方法為：將水稻稻桿放置在收集容器中，所述收集容器底部設有通孔，然后將褐飛虱放入所述收集容器中，用吸水透氣材料片或膜覆蓋收集容器的口部，從收集容器底部的通孔收集褐飛虱蜜露。所述吸水透氣材料片或膜優選濾紙。采用此種方案，將褐飛虱放入后，便于集中收集褐飛虱蜜露，操作簡單、效率高，且不容易漏出；采用濾紙覆蓋收集容器的口部，減少了水蒸氣的影響。