[發明專利]強冬性白菜型冬油菜CAT酶分子標記及QTL定位

有效

• 申請號: 201510211104.1
• 申請日: 2015-04-29
• 公開（公告）號: CN104988212B
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 孫萬倉;楊剛;劉自剛;曾秀存;武軍艷;方彥;李學才;孔德晶;劉海卿;錢武
• 申請（專利權）人: 甘肅農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 甘肅省知識產權事務中心 62100
• 代理人: 孫惠娜

1.強冬性白菜型冬油菜CAT酶QTL定位，其特征在于：通過篩選步驟得到強冬性白菜型冬油菜CAT酶的3個QTL位點，分別命名為：Qcat.gsau-2A-1、Qcat.gsau-2A-2和Qcat.gsau-2A-3，與3個強冬性白菜型冬油菜CAT酶QTL位點連鎖的3個分子標記分別為：BrID90127、BrID10421和BrID10709；3個QTL位點定 位 區 間全部位于BrID90127-BrID10421 、BrID90127-BrID10421 和 BrID10421-BrID10709之間；

其中Qcat.gsau-2A-1位點位于2A染色體上，與分子標記BrID90127和BrID10421連鎖，可解釋39.2403%的表型變異，加性效應為0.4611，顯性效應12.0654；

Qcat.gsau-2A-2位于2A染色體上，與分子標記BrID90127和BrID10421連鎖，可解釋37.3135%的表型變異，加性效應為0.1505，顯性效應11.6888；

Qcat.gsau-2A-3位于2A染色體上，與分子標記BrID10421和BrID10709連鎖，可解釋38.2068%的表型變異，加性效應為0.1846，顯性效應11.3414；

3個分子標記引物的序列分別如下：

BrID90127-F：CGCTTTATGGGTTGATCGTA

BrID90127-R：GATTAACAGAACTAAGTAAAGCCACTT

BrID10421-F：GCATTATTTTGTCGGTTGAG

BrID10421-R ：GACGATGTTATGAACGACAG

BrID10709-F：TGAGGAAGAAACAAGTAGCTG

BrID10709-R：ATGATGTGCTCGTGTGTTAT。

2.根據權利要求1所述的強冬性白菜型冬油菜CAT酶QTL定位，其特征在于篩選包括有以下步驟：

（1）構建分離群體：利用多代套袋自交的強冬性親本超強抗寒冬油菜隴油7號和強抗寒冬油菜隴油9號配置雜交組合，雜交F1代自交產生F2代分離群體；

（2）油菜葉片DNA提取：采用CTAB法提取親本隴油7號和隴油9號及F2代分離群體的葉片DNA；

（3）引物來源及合成： 315對引物，其中SSR引物51對，InDel 引物264對；

（4）多態性引物篩選：利用合成的引物對兩親本DNA進行PCR擴增，篩選出具有多態性的引物；

（5）多態性引物在F2代檢測：將篩選出的多態性引物在F2代中進行檢測，獲得基因型數據；

（6）遺傳連鎖圖構建及QTL定位：根據F2代基因型數據，利用QTL IciMapping V3.3軟件進行遺傳連鎖圖構建及QTL定位。