[發明專利]一種自發酵液提取氨基葡萄糖的方法

在審

• 申請號: 201510209123.0
• 申請日: 2015-04-29
• 公開（公告）號: CN104788510A
• 公開（公告）日: 2015-07-22
• 發明（設計）人: 陳劍慧;韓勤更;周勁;金峰
• 申請（專利權）人: 江蘇賽奧生化有限公司
• 主分類號: C07H5/06
• 分類號: C07H5/06;C07H1/00
• 代理公司: 南通市永通專利事務所 32100
• 代理人: 葛雷

1.一種自發酵液提取氨基葡萄糖的方法，其特征是：包括下列步驟：

（一）發酵液絮凝、過濾

（1）絮凝劑配制

取絮凝劑聚丙烯酸鈉300g加入4L蒸餾水中，加熱至55～60℃，浸泡溶漲，2h后開攪拌溶解，加入蒸餾水6L，使其溶解均勻，配成10L3%的粘稠狀液體，再將3%的粘稠狀液體加入30L蒸餾水中，加熱至55～60℃，攪拌1h，加入蒸餾水60L，使其溶解稀釋，配成100L0.3%的稀釋液，備用；

（2）發酵液絮凝

取發酵液1000L，發酵產率92.28g/L，發酵液干物質含量11.36%，含N-乙酰氨基葡萄糖92.28㎏；

發酵培養終止后，夾層升溫至80℃，保溫10～15min，滅活，降溫至60℃。用鹽酸調pH至3.5～4.0，開動攪拌，轉速控制在60～80rpm，將上述配制的100L0.3%的絮凝劑稀釋液加入發酵液中，使其與發酵液充分混合，當大量絮狀物產生時，立即停止攪拌，自然混凝后形成菌體蛋白絮團懸浮于液體中；發酵液絮凝后體積為1182L，乙酰氨基葡萄糖含量為77.76g/L?，含乙酰氨基葡萄糖91.91㎏，絮凝收率為99.6%；

（3）過濾

（a）板框過濾

絮凝后的發酵液經板框過濾得到濾液1098L，濕菌體78.58㎏；

用蒸餾水洗滌菌體，得洗水150L，合并濾液、洗水合計1248L，乙酰氨基葡萄糖含量為72.26g/L?，濾液中含乙酰氨基葡萄糖90.18㎏，過濾收率為98.12%；

洗滌后的菌體經閃蒸干燥，得干菌體24.2㎏，蛋白質含量為72.56%；

??（b）陶瓷膜過濾

板框濾液再經孔徑為50nm陶瓷膜過濾，去除大分子膠原蛋白及色素，過濾溫度40～50℃，膜進口壓力為0.22～0.28MPa，膜出口壓力為0.12～0.18MPa，膜通量為50～80L/㎡·h，濾后體積為1622L,?乙酰氨基葡萄糖含量為54.78g/L?，濾液中含乙酰氨基葡萄糖88.85㎏,?膜濾收濾為98.53%；

（二）雙效濃縮

1622L膜濾液經雙效濃縮器濃縮，一效蒸發溫度80～90℃，二效蒸發溫度65～75℃，蒸發1326L水分，得濃縮液296L，乙酰氨基葡萄糖含量為296.2g/L，含乙酰氨基葡萄糖87.84㎏，濃縮收率為98.86%，蒸餾水回收；

（三）粗品制備

（1）鹽酸水解：將濃縮液296L與濃縮液等體積30%鹽酸加入帶有冷凝回流裝置的反應釜中，80℃回流水解4h；

（2）水解液真空濃縮：控制溫度65～70℃，真空度-0.06～-0.07MPa，濃縮至142L，氨基葡萄糖鹽酸鹽含量為596.5g/L，含氨基葡萄糖鹽酸鹽84.70㎏，水解收率為96.43%；

回收鹽酸用于乙酰氨基葡萄糖濃縮液水解；

（3）攪拌結晶：攪拌轉速30rpm，降溫至5～10℃，結晶時間5～6h，沉淀4h；

（4）離心：離心得氨基葡萄糖鹽酸鹽粗品104.89㎏，氨基葡萄糖鹽酸鹽含量為72.35%，含氨基葡萄糖鹽酸鹽75.89㎏，收濾89.6%；

離心所得母液加入濃鹽酸用于乙酰氨基葡萄糖濃縮液水解；

（四）精品制備

（1）脫色：粗品加入300㎏蒸餾水，加熱至65～70℃使其溶解，加入藥用活性炭1.5㎏，攪拌脫色30min；

（2）過濾：脫色液經板框過濾，濾液再經0.2μ精過濾器超濾，超濾液透光率達90%以上；

活性炭回收后、經再生使用。

（3）濾液真空濃縮：控制溫度65～70℃，真空度-0.06～-0.07MPa，濃縮至110.49L，氨基葡萄糖鹽酸鹽含量為654.1g/L，含氨基葡萄糖鹽酸鹽72.27㎏，精制收率為95.23%；

（4）結晶、干燥

攪拌結晶：攪拌轉速30rpm，降溫至5～10℃，結晶時間5～6h，沉淀4h；

離心：離心得氨基葡萄糖鹽酸鹽濕晶體79.66㎏；

母液加入濃鹽酸用于乙酰氨基葡萄糖濃縮液水解；

真空干燥：干燥溫度60℃，干燥8h，得到白色氨基葡萄糖鹽酸鹽70.89㎏，含量為98.56%，總收濾為75.71%，產品為白色結晶。