[發(fā)明專利]一種自發(fā)酵液提取氨基葡萄糖的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510209123.0
• 申請(qǐng)日: 2015-04-29
• 公開（公告）號(hào): CN104788510A
• 公開（公告）日: 2015-07-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳劍慧;韓勤更;周勁;金峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇賽奧生化有限公司
• 主分類號(hào): C07H5/06
• 分類號(hào): C07H5/06;C07H1/00
• 代理公司: 南通市永通專利事務(wù)所 32100
• 代理人: 葛雷

1.一種自發(fā)酵液提取氨基葡萄糖的方法，其特征是：包括下列步驟：

（一）發(fā)酵液絮凝、過(guò)濾

（1）絮凝劑配制

取絮凝劑聚丙烯酸鈉300g加入4L蒸餾水中，加熱至55～60℃，浸泡溶漲，2h后開攪拌溶解，加入蒸餾水6L，使其溶解均勻，配成10L3%的粘稠狀液體，再將3%的粘稠狀液體加入30L蒸餾水中，加熱至55～60℃，攪拌1h，加入蒸餾水60L，使其溶解稀釋，配成100L0.3%的稀釋液，備用；

（2）發(fā)酵液絮凝

取發(fā)酵液1000L，發(fā)酵產(chǎn)率92.28g/L，發(fā)酵液干物質(zhì)含量11.36%，含N-乙酰氨基葡萄糖92.28㎏；

發(fā)酵培養(yǎng)終止后，夾層升溫至80℃，保溫10～15min，滅活，降溫至60℃。用鹽酸調(diào)pH至3.5～4.0，開動(dòng)攪拌，轉(zhuǎn)速控制在60～80rpm，將上述配制的100L0.3%的絮凝劑稀釋液加入發(fā)酵液中，使其與發(fā)酵液充分混合，當(dāng)大量絮狀物產(chǎn)生時(shí)，立即停止攪拌，自然混凝后形成菌體蛋白絮團(tuán)懸浮于液體中；發(fā)酵液絮凝后體積為1182L，乙酰氨基葡萄糖含量為77.76g/L?，含乙酰氨基葡萄糖91.91㎏，絮凝收率為99.6%；

（3）過(guò)濾

（a）板框過(guò)濾

絮凝后的發(fā)酵液經(jīng)板框過(guò)濾得到濾液1098L，濕菌體78.58㎏；

用蒸餾水洗滌菌體，得洗水150L，合并濾液、洗水合計(jì)1248L，乙酰氨基葡萄糖含量為72.26g/L?，濾液中含乙酰氨基葡萄糖90.18㎏，過(guò)濾收率為98.12%；

洗滌后的菌體經(jīng)閃蒸干燥，得干菌體24.2㎏，蛋白質(zhì)含量為72.56%；

??（b）陶瓷膜過(guò)濾

板框?yàn)V液再經(jīng)孔徑為50nm陶瓷膜過(guò)濾，去除大分子膠原蛋白及色素，過(guò)濾溫度40～50℃，膜進(jìn)口壓力為0.22～0.28MPa，膜出口壓力為0.12～0.18MPa，膜通量為50～80L/㎡·h，濾后體積為1622L,?乙酰氨基葡萄糖含量為54.78g/L?，濾液中含乙酰氨基葡萄糖88.85㎏,?膜濾收濾為98.53%；

（二）雙效濃縮

1622L膜濾液經(jīng)雙效濃縮器濃縮，一效蒸發(fā)溫度80～90℃，二效蒸發(fā)溫度65～75℃，蒸發(fā)1326L水分，得濃縮液296L，乙酰氨基葡萄糖含量為296.2g/L，含乙酰氨基葡萄糖87.84㎏，濃縮收率為98.86%，蒸餾水回收；

（三）粗品制備

（1）鹽酸水解：將濃縮液296L與濃縮液等體積30%鹽酸加入帶有冷凝回流裝置的反應(yīng)釜中，80℃回流水解4h；

（2）水解液真空濃縮：控制溫度65～70℃，真空度-0.06～-0.07MPa，濃縮至142L，氨基葡萄糖鹽酸鹽含量為596.5g/L，含氨基葡萄糖鹽酸鹽84.70㎏，水解收率為96.43%；

回收鹽酸用于乙酰氨基葡萄糖濃縮液水解；

（3）攪拌結(jié)晶：攪拌轉(zhuǎn)速30rpm，降溫至5～10℃，結(jié)晶時(shí)間5～6h，沉淀4h；

（4）離心：離心得氨基葡萄糖鹽酸鹽粗品104.89㎏，氨基葡萄糖鹽酸鹽含量為72.35%，含氨基葡萄糖鹽酸鹽75.89㎏，收濾89.6%；

離心所得母液加入濃鹽酸用于乙酰氨基葡萄糖濃縮液水解；

（四）精品制備

（1）脫色：粗品加入300㎏蒸餾水，加熱至65～70℃使其溶解，加入藥用活性炭1.5㎏，攪拌脫色30min；

（2）過(guò)濾：脫色液經(jīng)板框過(guò)濾，濾液再經(jīng)0.2μ精過(guò)濾器超濾，超濾液透光率達(dá)90%以上；

活性炭回收后、經(jīng)再生使用。

（3）濾液真空濃縮：控制溫度65～70℃，真空度-0.06～-0.07MPa，濃縮至110.49L，氨基葡萄糖鹽酸鹽含量為654.1g/L，含氨基葡萄糖鹽酸鹽72.27㎏，精制收率為95.23%；

（4）結(jié)晶、干燥

攪拌結(jié)晶：攪拌轉(zhuǎn)速30rpm，降溫至5～10℃，結(jié)晶時(shí)間5～6h，沉淀4h；

離心：離心得氨基葡萄糖鹽酸鹽濕晶體79.66㎏；

母液加入濃鹽酸用于乙酰氨基葡萄糖濃縮液水解；

真空干燥：干燥溫度60℃，干燥8h，得到白色氨基葡萄糖鹽酸鹽70.89㎏，含量為98.56%，總收濾為75.71%，產(chǎn)品為白色結(jié)晶。