[發(fā)明專利]一種合浦珠母貝表皮生長因子樣基因Pf-egf1及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510207812.8
• 申請(qǐng)日: 2015-04-28
• 公開（公告）號(hào): CN104830868A
• 公開（公告）日: 2015-08-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 喻達(dá)輝;朱文杰;黃桂菊;張東玲;范嗣剛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所;集美大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/12
• 分類號(hào): C12N15/12;C07K14/485
• 代理公司: 廣州知友專利商標(biāo)代理有限公司 44104
• 代理人: 宣國華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于水產(chǎn)生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及的是一種合浦珠母貝(Pinctada?fucata)表皮生長因子樣基因Pf-egf1及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

表皮生長因子(epidermal?growth?factor，EGF)是一個(gè)大家族，包括表皮生長因子(epidermal?growth?factor，EGF)、轉(zhuǎn)化生長因子-α(transforming?growth?factor-α，TGF-α)、肝素結(jié)合性表皮生長因子(heparin?binding?EGF，HB-EGF)、雙調(diào)蛋白(amphiregulin，AR)、細(xì)胞素(betacellulin，BTC)、神經(jīng)調(diào)節(jié)素(neuregulin，NGR)與表皮素(epiregulin，EPR)等。它們都包含至少一個(gè)保守的EGF-like結(jié)構(gòu)域，這個(gè)結(jié)構(gòu)域由3對(duì)二硫鍵所維持。EGF與EGF受體(epidermal?growth?factor?receptor，EGFR)結(jié)合，形成同源或者異源二聚體，引發(fā)一系列的信號(hào)傳導(dǎo)，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)DNA、RNA以及蛋白質(zhì)的合成，從而誘導(dǎo)細(xì)胞的有絲分裂、遷移和分化等過程。在目前的報(bào)道中，脊椎動(dòng)物研究較多，無脊椎動(dòng)物較少。Herman等從靜水椎實(shí)螺(Lymnaea?stagnalis)中克隆得到EGF同源基因L-egf，發(fā)現(xiàn)在生長及損傷修復(fù)過程中起著重要作用。Eri等人從海鞘中(Herdmania?curvata)獲得了一個(gè)在變態(tài)過程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用的Hemps，該基因被證明是EGF家族相關(guān)基因。Hursh等人研究了海膽(Strongylocentrotus?purpuratus)中EGF家族相關(guān)基因Sp-egfI與Sp-egfII，發(fā)現(xiàn)其在海膽的受精以及胚胎發(fā)育等過程中發(fā)揮著重要的作用。

合浦珠母貝(Pinctada?fucata)是我國海水珍珠養(yǎng)殖的主要珍珠貝，在我國主要分布在南方沿海地區(qū)，特別在廣西合浦至廣東沿海區(qū)域分布的為多，具有很高的價(jià)值。目前有關(guān)合浦珠母貝功能基因的研究主要集中在免疫基因和珍珠形成相關(guān)基因上面，如熱休克蛋白Hsp70基因，組織蛋白酶基因，β-肌動(dòng)蛋白基因，殼基質(zhì)蛋白相關(guān)基因等，而與生長、繁育等具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值性狀相關(guān)的功能基因研究較少。合浦珠母貝在幼體階段需要經(jīng)歷一系列變態(tài)發(fā)育過程，在珍珠養(yǎng)殖過程中需要進(jìn)行插核手術(shù)，從而導(dǎo)致?lián)p傷。由于EGF具有損傷修復(fù)的功能，因此對(duì)育珠手術(shù)傷口的恢復(fù)可能會(huì)起作用。但目前還沒有關(guān)于如何恢復(fù)育珠手術(shù)損傷和傷口方面的研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種合浦珠母貝表皮生長因子樣基因Pf-egf1和由此推斷的氨基酸序列。

本發(fā)明的第一個(gè)目的是通過如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：一種合浦珠母貝表皮生長因子樣基因Pf-egf1，該基因Pf-egf1的cDNA核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

該基因Pf-egf1的cDNA核苷酸序列的394bp～396bp為起始密碼子ATG，1093bp～1095bp為終止密碼子TGA，擁有702bp開放閱讀框。

該合浦珠母貝表皮生長因子樣基因Pf-egf1，它的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

表皮生長因子(EGF)家族目前主要在脊椎動(dòng)物中報(bào)道比較多。本發(fā)明利用合浦珠母貝的轉(zhuǎn)錄組，在貝類首次克隆得到EGF-like基因Pf-egf?1，功能結(jié)構(gòu)域分析發(fā)現(xiàn)Pf-egf1包含一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域(1-34aa)和一個(gè)EGF-like結(jié)構(gòu)域(170-211aa)，與EGF家族其他成員及其相關(guān)蛋白相比，Pf-egf?1與他們有著共同的EGF-like結(jié)構(gòu)域(圖1)，包括典型的6個(gè)半胱氨酸殘基與3個(gè)C末端殘基(圖1)，這與EGF家族及其相關(guān)蛋白是相同的，表明Pf-egf?1是EGF家族相關(guān)蛋白，表皮生長因子的6個(gè)半胱氨酸殘基和3個(gè)C末端殘基是維持其在生物體內(nèi)得活性所必須的。