[發(fā)明專利]一種參芎葡萄糖注射液的化學(xué)成分鑒定及活性成分篩選方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510202101.1
• 申請(qǐng)日: 2015-04-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105044223B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-12-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 葉湘武;鄭林;廖尚高;黃勇;王永林;蘭燕宇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴州景峰注射劑有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 上海天翔知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司31224
• 代理人: 呂伴

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥制劑質(zhì)量控制的技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種參芎葡萄糖注射液的化學(xué)成分鑒定及活性成分篩選方法。

背景技術(shù)

“參芎葡萄糖注射液”由丹參和鹽酸川芎嗪采用現(xiàn)代制劑技術(shù)制備而成的復(fù)方制劑，臨床上主要廣泛應(yīng)用于心血管疾病的治療。現(xiàn)代研究表明，丹參中的多種化學(xué)成分以及鹽酸川芎嗪均具有心臟保護(hù)作用的生物活性，但丹參及鹽酸川芎嗪配伍所制成的復(fù)方制劑“參芎葡萄糖注射液”，其化學(xué)成分與藥效之間的關(guān)系目前尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。由于“參芎葡萄糖注射液”藥效物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確，參芎葡萄糖注射液現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的含量測(cè)定項(xiàng)目只對(duì)丹參素和鹽酸川芎嗪進(jìn)行定量控制，難以全面反映制劑的化學(xué)成分特征。因此，建立一種能快速、有效地確定參芎葡萄糖中各成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其主要活性成分的方法，實(shí)現(xiàn)對(duì)其物質(zhì)群的全面控制，為參芎葡萄糖注射液的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供科學(xué)試驗(yàn)依據(jù)，具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于，提供一種參芎葡萄糖注射液的化學(xué)成分鑒定及活性成分篩選方法。

本發(fā)明針對(duì)“參芎葡萄糖注射液”藥效物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的含量測(cè)定成分單一的問(wèn)題，首次對(duì)參芎葡萄糖注射液的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)、整體研究，建立的方法可以快速、有效地確定參芎葡萄糖注射液中各成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其主要活性成分，可為參芎葡萄糖注射液的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)，提升制劑的質(zhì)量控制水平。

本發(fā)明所述的參芎葡萄糖注射液的化學(xué)成分鑒定及活性成分篩選方法，由以下步驟組成：

步驟一、擬定化學(xué)成分鑒定分析條件步驟

運(yùn)用超高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器-串聯(lián)四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜方法，運(yùn)用超高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器-串聯(lián)四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(UPLC-DAD-Q/TOF)技術(shù)，擬定的分析條件；

步驟二、獲取參芎葡萄糖注射液中各個(gè)色譜峰/成分步驟

根據(jù)步驟一中所擬定的化學(xué)成分鑒定分析條件，分別吸取對(duì)照品溶液和參芎葡萄糖注射液供試品溶液進(jìn)樣測(cè)定，獲取參芎葡萄糖注射液中各個(gè)色譜峰/成分的保留時(shí)間tR、紫外光譜圖UV、分子式、各個(gè)成分的質(zhì)量的一級(jí)質(zhì)譜圖和某成分的特征碎片離子的二級(jí)質(zhì)譜圖；

步驟三、化學(xué)成分結(jié)構(gòu)鑒定步驟

針對(duì)步驟二所獲取的參芎葡萄糖注射液中各個(gè)色譜峰/成分的保留時(shí)間tR、紫外光譜圖UV、分子式、各個(gè)成分的質(zhì)量的一級(jí)質(zhì)譜圖和某成分的特征碎片離子的二級(jí)質(zhì)譜圖來(lái)鑒定步驟二的參芎葡萄糖注射液供試品溶液中所含有的化學(xué)成分的特征；其中一方面，通過(guò)步驟二的對(duì)照品溶液比對(duì)試驗(yàn)，分析步驟二的參芎葡萄糖注射液供試品溶液中已知化合物的結(jié)構(gòu)；另一方面，通過(guò)未知化合物的分子式、紫外最大吸收波長(zhǎng)、分子離子及碎片離子信息、質(zhì)譜裂解特征，鑒定步驟二的參芎葡萄糖注射液供試品溶液的未知化合物結(jié)構(gòu)；

步驟四、心肌細(xì)胞萃取實(shí)驗(yàn)步驟

利用固相萃取小柱富集純化，制備參芎葡萄糖注射液樣品，選擇與參芎葡萄糖注射液樣品臨床適應(yīng)癥心血管疾病相關(guān)的H9c2心肌細(xì)胞作為載體進(jìn)行心肌細(xì)胞萃取，制備細(xì)胞萃取陰性對(duì)照溶液、參芎葡萄糖注射液細(xì)胞萃取樣品溶液和細(xì)胞萃取空白對(duì)照溶液；

步驟五、活性成分篩選步驟

運(yùn)用超高效液相色譜-電噴霧-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-ESI-MS/MS)技術(shù)，擬定的分析條件，分別對(duì)步驟四的參芎葡萄糖注射液樣品、細(xì)胞萃取空白對(duì)照溶液、細(xì)胞萃取陰性對(duì)照溶液、參芎葡萄糖注射液細(xì)胞萃取樣品溶液進(jìn)樣分析；應(yīng)用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)的離子通道即MRM方式，通過(guò)對(duì)母離子和子離子特異性的跟蹤監(jiān)測(cè)，篩選出參芎葡萄糖注射液中能與心肌細(xì)胞有相互作用的成分，即為參芎葡萄糖注射液中具有心血管作用的潛在活性成分。

在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，所述步驟二中，所述擬定的分析條件具體如下：

1)擬定UPLC液相條件：色譜柱：Agilent Plus Plus C₁₈(2.1mm×100mm,1.8μm)柱；柱溫：20℃；流速：0.30mL·min^-1；流動(dòng)相：0.1％甲酸乙腈(A)-0.1％甲酸水(B)；梯度洗脫條件：0～18min，5％～62％(A)；18～19min，62％～100％(A)；進(jìn)樣體積：1μL；