[發(fā)明專利]引物組、試劑盒及其在HPV全基因組檢測中的用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510202043.2
• 申請日: 2015-04-24
• 公開（公告）號: CN104928399A
• 公開（公告）日: 2015-09-23
• 發(fā)明（設計）人: 易吉
• 申請（專利權）人: 深圳華大基因科技有限公司;深圳市第二人民醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京清亦華知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東;陳伊雯

技術領域

本發(fā)明涉及病毒檢測領域，具體的，本發(fā)明涉及一組引物、該組引物在HPV基因組的擴增和/或HPV的檢測中的用途、一種試劑盒、該試劑盒在HPV基因組擴增、HPV分型和/或HPV檢測中的用途，以及一種獲得HPV全基因組序列的方法。

背景技術

宮頸癌是世界上第三大常見女性腫瘤，并且86％病例發(fā)生在發(fā)展中國家[Arbyn?M,Castellsague?X,de?Sanjose?S,Bruni?L,Saraiya?M,Bray?F,FerlayJ:Worldwide?burden?of?cervical?cancer?in?2008.Ann?Oncol2011,22:2675–2686.]。據(jù)世界范圍內(nèi)統(tǒng)計，每年大約有46萬左右新發(fā)病例，有超過20萬的婦女死于宮頸癌，世界每年發(fā)病的75-80％在發(fā)展中國家，中國由于人口眾多，每年新發(fā)病例超過13萬之多，占到世界發(fā)病的25％，且近年來處于增長趨勢，在廣大農(nóng)村地區(qū)增高趨勢更加明顯，并呈現(xiàn)發(fā)病年齡提前的現(xiàn)象[開麗比努·依馬木,馬彩玲.宮頸癌的診斷治療進展[J].地方病通報,2006,21(6):62-65.]。

1977年ZurHause首先提出人乳頭瘤病毒(Human?papillomavirus，HPV)是宮頸癌致病因素的假設；1992年，世界衛(wèi)生組織(WHO)宣布人乳頭瘤病毒是引起宮頸癌變的首要因素；1995年，國際癌癥研究署(IARC)專題討論會將HPV感染確定為宮頸癌的主要病因，明確宮頸癌是一種感染性疾病。HPV感染是宮頸癌發(fā)生的主要因素。

人乳頭瘤病毒是乳多空病毒科(Papovaviridae)A亞群內(nèi)的一組DNA病毒，無包膜，相對分子質(zhì)量為5×10⁶。基因組呈雙鏈閉環(huán)狀，含有7900對堿基。人乳頭狀瘤病毒是一個全球范圍來，廣泛傳播的DNA病毒，主要感染人的粘膜及皮膚。研究表示99.7％的宮頸癌組織中可以檢測到HPV病毒。

HPV雙鏈環(huán)狀基因組DNA，主要包括四個部分，早期區(qū)域，晚期區(qū)域，上游調(diào)控區(qū)和在E5及L2之間極短的高突變率的非編碼區(qū)。乳頭狀瘤病毒進化速度緩慢，以每年2±0.5×10^-8個堿基突變頻率進行。同時進化過程也呈現(xiàn)出組織及宿主特異性，導致HPV基因組多態(tài)性在進化過程中，只隨機發(fā)生在各型別少數(shù)病毒亞型內(nèi)[Bernard?H?U,Burk?R?D,Chen?Z,et?al.Classification?of?papillomaviruses(PVs)based?on?189PV?types?and?proposal?of?taxonomic?amendments(J).Virology,2010,401(1):70-79.]。

現(xiàn)有研究表明，HPV致病分子機制是病毒基因組DNA的復制和表達，其中早期基因區(qū)E1、E2、E4、E5、E6和E7轉(zhuǎn)錄是HPV在宿主細胞增殖的關鍵步驟[IARC?Working?Group?on?the?Evaluation?of?Carcinogenic?Risks?to?Humans.IARC?Monographs?on?the?evaluation?of?carcinogenic?risks?to?humans[M].World?Health?Organization,2007.]，目前對于HPV與宮頸癌發(fā)生的研究僅局限在高危型HPV型別之間，很少探討亞型致癌性的不同。