[發(fā)明專利]一種皮膚纖維母細(xì)胞的培養(yǎng)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510201219.2
• 申請(qǐng)日: 2015-04-23
• 公開（公告）號(hào): CN104830749A
• 公開（公告）日: 2015-08-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳海佳;王一飛;葛嘯虎;曾維杰;盧瑞珊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州賽萊拉干細(xì)胞科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

1.一種皮膚纖維母細(xì)胞的培養(yǎng)方法，皮膚預(yù)處理后加入胰蛋白酶，4℃消化后去除表皮，剪碎后置于離心管中加入含雙抗的PBS，離心棄掉漂浮的組織塊及上清，用完全培養(yǎng)基重懸沉淀的組織塊，添加雙抗，37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，隨后進(jìn)行換液和傳代處理直至第10代。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，所述預(yù)處理為皮膚除毛清洗后去除皮下組織和毛細(xì)血管。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的培養(yǎng)方法，所述胰蛋白酶濃度為0.1％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的培養(yǎng)方法，所述消化時(shí)間為12-16小時(shí)，所述去除表皮具體為消化后的皮膚加入含雙抗的PBS中刮去表皮。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的培養(yǎng)方法，所述含雙抗的PBS為含青霉素和鏈霉素的磷酸鹽緩沖液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)所述的培養(yǎng)方法，所述添加雙抗為添加青霉素-鏈霉素溶液。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述的培養(yǎng)方法，所述離心為1000rpm，離心3min。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任意一項(xiàng)所述的培養(yǎng)方法，所述完全培養(yǎng)基為高糖DMEM+10％FBS。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任意一項(xiàng)所述的培養(yǎng)方法，所述培養(yǎng)以經(jīng)明膠處理細(xì)胞培養(yǎng)板為載體。

10.根據(jù)權(quán)利要求9任意一項(xiàng)所述的培養(yǎng)方法，所述明膠處理為細(xì)胞培養(yǎng)板中加入0.1％明膠，孵育30min，回收明膠。