[發明專利]一株抑制馬鈴薯立枯絲核病菌的枯草芽孢桿菌

在審

• 申請號: 201510188051.6
• 申請日: 2015-04-20
• 公開（公告）號: CN104726384A
• 公開（公告）日: 2015-06-24
• 發明（設計）人: 李晶;曹旭;劉宇帥;陳靜宇;張淑梅;孟立強;姜威;胡基華
• 申請（專利權）人: 黑龍江省科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/125
• 代理公司: 哈爾濱市文洋專利代理事務所(普通合伙) 23210
• 代理人: 何強

技術領域

本發明涉及一株枯草芽孢桿菌。

背景技術

絲核菌是一類在自然界中廣泛存在的真菌，在全世界的耕作、非耕作土壤中均有分布，許多絲核菌很容易從染病植株及土壤中分離得到。絲核菌的寄主范圍極廣，可侵染43科200余種植物。絲核菌是一種土傳植物病原真菌，容易引起植物爛種、苗期猝倒。絲核菌在土壤中的腐生競爭力強，存活時間長，被認為是最具破壞力的土傳植物病原菌之一。絲核菌在菌絲分枝發生點附近縊縮，分枝點附近形成隔膜，菌絲經常呈直角或銳角分枝。生物防治主要是利用微生物之間的拮抗作用，選擇對農作物不造成危害的微生物抑制病原菌的生長。細菌、放線菌、真菌在植物病害生物防治中開發應用前景良好，生防菌劑的研究及開發有著重要的現實意義。微生物源農藥是目前應用最廣、發展最快、最有前途的一類生物農藥，是解決我國當前農業環境問題的主要突破口之一。

黑龍江省是馬鈴薯種植之鄉，近年來馬鈴薯種植面積不斷擴大，馬鈴薯產業發展迅猛。但是由于種薯生產者提供無病種薯的觀念不強，用種者常將非種薯做種薯應用，品種引進和調運過程中忽視檢疫把關；甚至有的種植區域種薯生產地區，不注意輪作倒茬；還有的在種植過程中對病害的防治措施落實的不認真，種種原因致使馬鈴薯病害日趨嚴重。馬鈴薯立枯絲核病就是其中之一，該病發病普遍，發病率達5％以上，危害程度也在日趨加重，不僅使產量降低20％，而且嚴重影響馬鈴薯品質，已成為馬鈴薯產業發展的一大障礙。

病原菌立枯絲核菌是一種全世界大量農作物和野生寄主的病原物，其菌核在塊莖上或土壤里越冬，或菌絲體在土壤里的植株殘體上越冬，第二年春季，當溫度、濕度條件適合時，菌核萌發侵入馬鈴薯幼芽、幼苗，特別是有傷口時侵入更多更快。在生長季節又可侵入根、地下莖、匍匐莖、塊莖。新塊莖上形成的菌核，或在土壤里又越冬的菌核，下一年遇到適宜的環境條件，又可發生侵染。總之，該病是種薯帶病和土壤傳播結合的病害，因此，給防治帶來不便。

發明內容

本發明提供一株枯草芽孢桿菌，可抑制馬鈴薯立枯絲核病菌，為馬鈴薯立枯絲核病的生物防治奠定基礎。

本發明抑制馬鈴薯絲核病菌的枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)PB12，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏日期為2015年3月11日，保藏編號為CGMCC?No.10603。

本發明枯草芽孢桿菌PB12革蘭氏染色陽性，桿狀，兩端鈍平，多數菌體串聯成串，呈不規則形狀。產芽孢，30℃培養24h芽孢形成率達80％以上，芽孢端生，橢圓形，不膨大，培養至48h，芽孢全部脫落。在NYDA固體培養基上的菌落呈乳白色，褶皺，邊緣不整齊，菌落中心凸起呈脊狀，易挑起。

本發明枯草芽孢桿菌PB12在50℃可以生長，pH5.7可以生長，7％NaCl可以生長，厭氧條件下不生長。發酵葡萄糖產酸不產氣，接觸酶反應陽性，淀粉水解呈陽性，VP試驗呈陽性，利用檸檬酸鹽反應呈陽性，明膠液化反應呈陽性，石蕊牛奶還原胨化反應呈陽性，硝酸鹽反應呈陽性，甲基紅反應呈陽性。

本發明枯草芽孢桿菌PB12可在NYD培養基上生長，最適生長溫度為30℃，最適pH為7.2～7.5，轉速150r/min。NYD培養基由牛肉浸膏8g、酵母膏5g、葡萄糖10g、瓊脂15g和蒸餾水1000mL組成。

本發明枯草芽孢桿菌PB12通過16S?rDNA序列比對分析，與芽孢桿菌屬有極高的同源性，同源性為98％以上。通過結合菌體形態特征、生長條件、生理生化鑒定結果確定枯草芽孢桿菌PB12屬于芽孢桿菌屬(Bacillus?Cohn)，為枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)。

平板抑菌實驗和培養瓶抑菌實驗表明，在固體培養和液體培養條件下，本發明枯草芽孢桿菌PB12均具有較強的抑制馬鈴薯立枯絲核病菌菌絲生長的能力，而且隨著培養天數的增加，抑菌效果越明顯。

本發明枯草芽孢桿菌PB12，屬于芽孢桿菌屬(Bacillus?Cohn)，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏日期為2015年3月11日，保藏編號為CGMCC?No.10603。

附圖說明

圖1為固體培養時枯草芽孢桿菌PB12的拮抗作用；圖2為液體培養時枯草芽孢桿菌PB12的拮抗作用。

具體實施方式

本發明技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式，還包括各具體實施方式間的任意組合。