[發明專利]一種重復性好的血管緊張素轉化酶檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201510169134.0
• 申請日: 2015-04-10
• 公開（公告）號: CN104792779A
• 公開（公告）日: 2015-07-22
• 發明（設計）人: 譚柏清;董雯;甘宜梧;王綺;包興艷;肖慧
• 申請（專利權）人: 山東博科生物產業有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 張世靜

技術領域

本發明涉及臨床體外檢測試劑技術領域，特別涉及一種血管緊張素轉化酶檢測試劑盒。

背景技術

血管緊張素轉化酶（Angiotensin-Converting?Enzyme,?ACE,?EC?3.4.15.1，系統命名為肽酰二肽水解酶，是一種哺乳動物組織中普遍存在的，含鋅離子的膜結合外肽酶（羧基端二肽），催化血管緊張素Ⅰ水解生成具有血管收縮作用的血管緊張素Ⅱ或水解具有血管收縮功能的緩激肽生成苯丙-精二肽，在食品和藥品行業廣泛使用。自?1898?年發現腎素以來，有關腎素-血管緊張素系（renin-angiotensin?system,?RAS?或?renin-angiotensin-aldosterone?system，RAAS）和激肽釋放酶-激肽系統（Kallikrein-Kinin?System,?KKS）的研究已進行了一百多年，這兩個系統主要通過?ACE?對血壓、電解質、體液平衡和心血管系統發育等控制而間接發揮作用，為此，RAS?和?KKS?在心臟和腎臟疾病中起著至關重要的作用，它所顯示的作用和功能已遠遠超出了人們的設想。目前?ACEI（Angiotensin-Converting?Enzyme?inhibitors）已經成為急性心肌梗死和心力衰竭治療的一類標準藥物（如：卡托普利captopril、依那普利?enalapril、西拉普利?cilazapril、貝拉普利?cilazapril、賴諾普利?lisinopril、雷米普利?ramipril）。然而長期使用?ACEI?藥物會出現咳嗽、腎功能減退、蛋白尿、高鉀血癥、低血壓、肝功能異常、味覺和腸胃功能紊亂、皮疹、血管神經性水腫等不良反應。

1954年，Leonard?T.?Skeggs博士從馬血漿中首次發現ACE，并發現此酶能催化血管緊張素Ⅰ水解去掉羧基端二肽（His-Leu）生成具有血管收縮作用的血管緊張素Ⅱ。Ng?和Vane發現體內的ACE催化循環系統（RAS?和?KKS）定位在肺中，此結果后來被很多研究驗證。

2000年，在研究和尋找與心衰相關的新基因時，兩個研究小組各自采用不同的方法從特發性擴張性心肌病病人的心臟標本和人淋巴瘤標本中克隆得到同?1?個新基因，并分別命名為ACE2和ACEH，隨后統一稱為?ACE2。它是迄今為止發現的ACE的第一個同類酶。在來源分布上，ACE在人體廣泛分布，而ACE2?有一定的組織特異性，主要存在于心臟和腎臟的動脈、小動脈和小靜脈，腎小管內皮，及腎內動脈和冠狀動脈的平滑肌細胞及胃腸系統。Gembardt等報道ACE2在鼠的肺臟中也有存在。

ACE?通常以三種形式存在，它們是一個基因的不同剪接產物。異構體Ⅰ在組織中普遍存在，稱為體細胞?ACE（somatic?ACE,?sACE），含有?1306?個氨基酸殘基。異構體Ⅱ和異構體Ⅲ表達于睪丸組織和成熟的精子細胞中，稱為睪丸?ACE（testic?ACE,?tACE），分別含有?732個氨基酸和?739?個氨基酸殘基。ACE2?由?805?個氨基酸組成，表觀分子量?120×103Da，其中包括?1?個由?17?個氨基酸組成的?N-末端信號肽區，1?個位于?274~378?位氨基酸的金屬蛋白酶鋅結合區?HEXXH?和?1?個錨定在細胞膜上的?C-末端。ACE2?與?ACE?在金屬蛋白酶的催化結構域約有?42%的同源性。sACE?由?1306?個氨基酸組成，表觀分子量?149×103Da，其中包括?N端信號肽30個氨基酸、兩個同源的催化活性中心（N-catalytic?domain）和（C-catalyticdomain）、親脂跨膜區1257~1276位氨基酸和細胞內結構域組成。tACE由732個氨基酸組成，只含1個催化活性中心，其中異構體Ⅱ表觀分子量為80×103Da，異構體Ⅱ表觀分子量83×103Da。異構體Ⅱ除了信號肽和N端與sACE?稍有差異，從68個氨基酸殘基開始，它們的序列完全相同。異構體Ⅲ與異構體Ⅱ的N完全相同，但第657個氨基酸開始就有所差異。

目前測定血清?ACE的方法有放射性核素法、分光光度法、熒光法、毛細管膠束電動色譜法。放射性核素法易受放射性核素的污染，不適于醫院常規應用。分光光度法操作繁瑣,?無法用于臨床日常測定。熒光法、毛細管膠束電動色譜法由于受到設備限制,?無法廣泛應用。用高效液相色譜法測定組織?ACE酶活性,?敏感性和特異性大大高于常用的紫外分光光度法。但是由于受設備限制,?推廣難度較大。