[發(fā)明專利]雜交瘤細胞株McAb1H2及兔出血癥RHDVa型病毒單克隆抗體

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510149266.7
• 申請日: 2015-04-01
• 公開（公告）號: CN104694481B
• 公開（公告）日: 2017-07-07
• 發(fā)明（設計）人: 劉家森;曲連東;姜騫;郭東春;劉大飛;劉春國;李志杰;仇錚;田進;吳紅霞;劉明
• 申請（專利權）人: 中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/10
• 代理公司: 哈爾濱市文洋專利代理事務所(普通合伙)23210
• 代理人: 何強

技術領域

本發(fā)明涉及一株雜交瘤細胞株及其分泌的單克隆抗體。

背景技術

兔出血癥(Rabbit Hemorrhagic Disease,RHD)，俗稱“兔瘟”(Rabbit Plague)，是由兔出血癥病毒(Rabbit Hemorrhagic Disease Virus,RHDV)引起的急性、烈性、接觸性傳染病，以肝壞死、實質(zhì)臟器水腫、呼吸系統(tǒng)及全身多器官淤血及出血性變化為主要特征，對養(yǎng)兔業(yè)通常造成毀滅性的打擊。

2013年Ghislaine Le Gall-Reculé等人報道了有RHDV2型病毒的出現(xiàn)，RHDV 2型病毒與RHDVa型病毒核衣殼蛋白基因序列的同源性為82.4％，氨基酸序列的同源性為89.2％。這兩株病毒的免疫交叉保護率為75％。VP60基因是病毒唯一的衣殼蛋白編碼基因，在RHDVa型病毒中VP60基因的同源性在93.7％～99.8％之間；在RHDV2型病毒中VP60基因的同源性為98.5％。由于RHDV 2型病毒與RHDVa型病毒VP60蛋白氨基酸序列的同源性為89.2％，兩者相似的抗原位點多。所以，目前還未有能夠單獨識別RHDV2型病毒或RHDVa型病毒的單克隆抗體。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明是為了解決目前沒有能夠單獨識別RHDV2型病毒或RHDVa型病毒的單克隆抗體的問題，而提供的雜交瘤細胞株McAb 1H2及兔出血癥RHDVa型病毒單克隆抗體。

本發(fā)明雜交瘤細胞株McAb 1H2為小鼠雜交瘤細胞(Mus musculus Hybridoma)McAb1H2，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No.10317。

本發(fā)明兔出血癥RHDVa型病毒的單克隆抗體，由保藏號為CGMCC No.10317的雜交瘤細胞株McAb 1H2產(chǎn)生。

本發(fā)明雜交瘤細胞株McAb 1H2分泌的兔出血癥RHDVa型病毒的單克隆抗體可以單獨識別RHDVa型病毒和VP60a蛋白；該單克隆抗體分子重鏈為IgG1亞型，輕鏈為Kappa亞型(如圖1所示)。

利用本發(fā)明兔出血癥RHDVa型病毒的單克隆抗體可以準確的鑒別出患有兔出血癥的兔子具體感染的是否為RHDVa型病毒，能夠更有針對性的采取措施，對后期的免疫和防治具有深遠的意義。

雜交瘤細胞株McAb 1H2為小鼠雜交瘤細胞McAb 1H2，屬于小鼠屬(Mus)，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏號為CGMCC No.10317，保藏日期為2015年1月21日。

附圖說明

圖1是雜交瘤細胞株McAb 1H2分泌的兔出血癥RHDVa型病毒的單克隆抗體分子亞型鑒定結(jié)果圖。

圖2是雜交瘤細胞株McAb 1G2分泌的兔出血癥RHDV2型病毒的單克隆抗體分子亞型鑒定結(jié)果圖。

圖3是雜交瘤細胞株McAb 1H2所分泌的抗體分子的ELISA鑒定結(jié)果圖，圖3中a為RHDVa病毒粒子；b為重組Bac-VP60a蛋白；c為重組Bac-VP602蛋白。

圖4是雜交瘤細胞株McAb 1G2所分泌的抗體分子的ELISA鑒定結(jié)果圖，圖4中a為RHDVa病毒粒子；b為重組Bac-VP60a蛋白；c為重組Bac-VP602蛋白。

圖5是雜交瘤細胞株McAb 1H2所分泌的抗體分子的Western blot鑒定結(jié)果圖，圖5中M為蛋白質(zhì)分子量marker；b為重組Bac-VP60a蛋白；c為重組Bac-VP602蛋白。

圖6是雜交瘤細胞株McAb 1G2所分泌的抗體分子的Western blot鑒定結(jié)果圖，圖6中M為蛋白質(zhì)分子量marker；b為重組Bac-VP60a蛋白；c為重組Bac-VP602蛋白。

圖7是雜交瘤細胞株McAb 1H2所分泌的抗體分子的IFA鑒定結(jié)果圖，圖7中b為rBacmid-VP60a感染的Sf9細胞；c為rBacmid-VP602感染的Sf9細胞。

圖8是雜交瘤細胞株McAb 1G2所分泌的抗體分子的IFA鑒定結(jié)果圖，圖8中b為rBacmid-VP60a感染的Sf9細胞；c為rBacmid-VP602感染的Sf9細胞。

具體實施方式

本發(fā)明技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式，還包括各具體實施方式間的任意組合。