[發明專利]一種疊氮化鈉誘發柑橘芽變的處理方法

有效

• 申請號: 201510112246.2
• 申請日: 2015-03-13
• 公開（公告）號: CN104719015B
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: 孔佑涵;苑平;李先信;李健權;易春;張文;吳娟娟;張平
• 申請（專利權）人: 湖南省園藝研究所
• 主分類號: A01G7/06
• 分類號: A01G7/06
• 代理公司: 長沙七源專利代理事務所(普通合伙)43214
• 代理人: 鄭雋

技術領域

本發明屬于生物技術研發技術領域，涉及一種疊氮化鈉誘發柑橘芽變的處理方法。

背景技術

相比于其他化學誘變劑，疊氮化鈉(NaN₃)具有無殘毒、使用相對安全的優點，但至今尚未見利用疊氮化鈉誘變柑橘腋芽方法的研究報道。疊氮化鈉已被應用于大麥、水稻、向日葵、大豆、花卉和蘋果等植物的育種研究中，并且獲得了一些有益的變異植物材料；目前，柑橘新品種選育過程中，疊氮化鈉誘發柑橘芽變的處理方法存在以下缺陷：

1.疊氮化鈉有效引發柑橘芽變的濃度(試劑配制)和處理時間不明確

在疊氮化鈉如何處理柑橘植株才能有效引起芽變的問題上，至今沒有研究報道，因此疊氮化鈉有效引發柑橘芽變的濃度(試劑配制)和處理時間不明確。

2.利用疊氮化鈉簡便、有效侵染柑橘腋芽的處理方法未有研究報道

化學試劑浸泡柑橘枝條的方法需要較多的處理液和特制的器具，成本較高，存在安全隱患，且不便于大量處理柑橘腋芽；利用注射器注入方法不易將處理液有效注入柑橘的腋芽周圍的皮層內，操作困難；大量處理柑橘腋芽時，利用含有處理液棉團包覆傷口的方法較為費時、繁瑣；溫度和空氣流動等環境因素變化容易導致涂抹和滴液侵染方法的處理液濃度變化，難以保證處理條件的有效性。

發明內容

為了克服現有技術中存在的缺陷，本發明提出了一種疊氮化鈉誘發柑橘芽變的處理方法，該方法明確疊氮化鈉有效引發柑橘腋芽變異的濃度(試劑配制)和處理時間等條件，并且研發簡便、有效侵染柑橘腋芽的化學誘變處理方法，以應用于柑橘芽變選種，解決柑橘自然變異率小無法主動大規模進行柑橘資源創新等問題。

其技術方案如下：

一種疊氮化鈉誘發柑橘芽變的處理方法，包括以下步驟：

步驟1.NaN₃處理液配置：稱取適量的疊氮化鈉加入在pH值為3.00(±0.05)的0.1mol/L磷酸鉀鹽緩沖液中，配置成終濃度為5mM的疊氮化鈉處理液，在使用處理液時加入適量6-BA(6-BA終濃度為0.3％)。

步驟2.選取柑橘1-2年生嫁接苗，剪除待處理枝條未完全木質化部分，摘除枝條留存部分的所有葉片和已萌發的芽。

步驟3.用鋒利的刀片在枝條留存部分的各葉腋上刻傷，深度刻破表皮即可，每個葉腋橫向(垂直于枝條方向)和縱向(順于枝條方向)各刻5下，刀口兩端須超過葉腋處1-2mm。

步驟4.利用吸水紙(或含水性較好的衛生紙)纏裹待處理的枝條1-2層，利用移液器等將NaN₃處理液侵濕纏裹的吸水紙(或含水性較好的衛生紙)至飽和(紙的最大含液量)。

步驟5.利用保鮮膜罩裹枝條至處理結束以避免處理液蒸發；處理時間為24小時；處理時枝條須避免強光照射導致增溫，處理期內須保證枝條水平(防止直立時處理液由于重力原因積于下部而上部處理液不足)。

步驟6.處理結束后，揭除包裹的吸水紙，將植株置于室外等正常培養條件下生長，5天以后即可觀察到一些葉腋處萌發生長出新梢，隨后即可進行葉片形態等變異性狀觀察統計。在處理后的培養生長過程，植株未處理(刻傷和處理液侵染)部分生發的芽要及時抹除摘掉。

步驟7.實驗結果統計方法：處理后30天統計變異數量；腋芽處理后成活率＝處理后腋芽成活數量/誘變處理腋芽數量，新梢變異率＝葉片變異的新梢數量/處理后腋芽成活數量。

本發明的有益效果為：

1.本方法所利用的處理液配制、處理條件等，使處理后成活腋芽發育的新梢葉片變異效率可達5％以上，因此，誘變效果明顯、具有應用價值。

2.本方法操作簡單、容易掌握；試劑用量較少且無需特別的器具，成本較低；因此可適用于主動大規模進行誘發柑橘芽變的柑橘資源創新工作。

附圖說明

圖1為本發明疊氮化鈉誘發柑橘芽變的處理方法的流程示意圖。

具體實施方式

下面結合附圖和具體實施方式對本發明的技術方案作進一步詳細地說明。

利用本方法已于2014年3月-6月、2014年8月-11月進行了兩次大規模實驗：實驗結果：