[發(fā)明專利]刺海松中分離的降血脂活性肽及其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510099688.8
• 申請(qǐng)日: 2015-03-07
• 公開（公告）號(hào): CN104651437A
• 公開（公告）日: 2015-05-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉紅衛(wèi)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 劉紅衛(wèi)
• 主分類號(hào): C12P21/06
• 分類號(hào): C12P21/06;C07K7/08;C07K14/405;A61K38/10;A61K38/16;A61P3/06
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術(shù)領(lǐng)域

?本發(fā)明涉及的是生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從刺海松中分離得到的治療高血脂的活性肽。

背景技術(shù)

心血管疾病在我國(guó)居于死亡原因的第一或第二位,?其中冠心病的發(fā)病與死亡率在某些地區(qū)正在上升。已有的證據(jù)說明冠心病的發(fā)病中有若干危險(xiǎn)因素起重要作用,?包括高膽固醇血癥、高血壓、吸煙和糖尿病。血脂異常（dyslipdemia）一般是指血中總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C）、甘油三酯（TG）超過正常范圍及(或)高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C）低下。低高密度脂蛋白血癥也是重要的危險(xiǎn)因素。在以上各因素中高膽固醇血癥最被重視,?其臨床意義已經(jīng)反復(fù)證實(shí),?隨血膽固醇的長(zhǎng)期增高,?冠心病事件的發(fā)生率增加;?長(zhǎng)期控制血膽固醇于合適的水平,?可以預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化,?而降低血膽固醇可以減輕動(dòng)脈粥樣斑塊,?減少冠心病事件。近年來,?對(duì)高甘油三酯血癥在動(dòng)脈粥樣硬化中的意義的認(rèn)識(shí)正在加深。因此,?在廣大人群中進(jìn)行高脂血癥的防治成為動(dòng)脈粥樣硬化防治的重要環(huán)節(jié)。合理的飲食與生活調(diào)節(jié)對(duì)防治高脂血癥極為重要,?大多數(shù)人可以經(jīng)過此法降低血脂。近來新發(fā)展的調(diào)脂藥物已能部分地控制飲食治療所不能控制的高脂血癥。

????申請(qǐng)人通過研究發(fā)現(xiàn)，刺海松通過小鼠喂食實(shí)驗(yàn)，該藻類具有較好的降低血脂的效果。為了進(jìn)一步的研究究竟是什么物質(zhì)起到降脂的作用，申請(qǐng)人通過提取實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了一系列的小肽具有較好的降血脂的效果。

發(fā)明內(nèi)容

一方面本發(fā)明涉及一類降血脂多肽。其結(jié)構(gòu)具有以下形式：

CHS-03：PSDESPRLVPFAKGSGGRVL?????????20

CHS-07：CRPGSRILDCQQIVPPA????????????17

CHS-10：IIHIMMEDGSSGSSIVIVIV??????????20

CHS-12：QQMFSVRGGSCCDMNNRS????????18

CHS-15：MMGSFVIIPPGSSRVMCT??????????18

CHS-17：GSMRIVVGSMNNSSRSVSPH????????20

CHS-20：HAMRIVVMMPHIIISSSRVFS?????????21

CHS-21：CCACPHMGSRPPHIHHQQCC????????20

CHS-23：VVMMHIGSRPVNVPPIIPVAG????????21

CHS-24：GGSFVMMTHPACPGSVGSSR????????20

CHS-27：INNGSPHIPPGSRVCPCCAAQP????????22

另一方面，本發(fā)明提供一種分離所述多肽的方法，(1)將刺海松先用PBS緩沖液清洗，然后用13mmol/L?HCl溶液勻漿在特定的32攝氏度條件下制備成粗制液；(2)將步驟(1)所得粗制液用7000轉(zhuǎn)/分鐘離心20分鐘，收集上清液，將上清液用三層紗布過濾，而后加入木瓜蛋白酶（酶活力為800AU/g）1kg，繼續(xù)保溫并不斷攪拌進(jìn)行酶解反應(yīng)3h，得到酶解液。用葡聚糖G-50(Sephadex?G-50)(1.5cm×90cm)分離，18mmol/L?HCl溶液洗脫，流速1.3mL/分鐘，收集洗脫產(chǎn)物，調(diào)節(jié)溶液至pH6.8，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，上清液冷凍干燥備用；經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)，回收小分子量的條帶，經(jīng)過驗(yàn)證，獲得了35個(gè)小的多肽，經(jīng)過試驗(yàn)證實(shí)了其中有11個(gè)具有較好的生物學(xué)活性。

另一方面，本發(fā)明提供一種藥物組合物，所述的組合物含有如上所述的體多肽。

如上所述的藥物組合物，其還含有還包含一種或多種藥學(xué)上可接受的載體；?優(yōu)選地，所述藥學(xué)上可接受的載體選自：水溶性填充劑、pH調(diào)節(jié)劑、?穩(wěn)定劑、注射用水和滲透壓調(diào)節(jié)劑；

更優(yōu)選地，所述水溶性填充劑選自以下的一種或幾種：甘露醇、低分子右旋糖苷、山梨醇、聚乙二醇、葡萄糖、乳糖和半乳糖；

更優(yōu)選地，所述pH調(diào)節(jié)劑為生理可接受的酸、堿和/或鹽，優(yōu)選選自以下的一種或幾種：

非揮發(fā)性酸如枸櫞酸、磷酸、乳酸、酒石酸或鹽酸，堿如氫氧化鉀、氫氧化鈉或氫氧化鉀或氫氧化銨，鹽如碳酸鈉或碳酸鉀或碳酸銨鹽，碳酸氫鈉或碳酸氫鉀或碳酸氫銨鹽；