[發(fā)明專利]細(xì)交鏈孢菌酮酸在制備微生物源殺菌劑中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510099629.0
• 申請日: 2015-03-07
• 公開（公告）號: CN104770372A
• 公開（公告）日: 2015-07-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 花日茂;呂培;付穩(wěn);吳祥為;史陶中;李湘瓊;柏鈺;馬鑫;操海群
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01N43/36
• 分類號: A01N43/36;A01P3/00
• 代理公司: 合肥金安專利事務(wù)所 34114
• 代理人: 金惠貞

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物農(nóng)藥領(lǐng)域，具體涉及繡線菊內(nèi)生真菌發(fā)酵代謝物中分離的抑菌活性物質(zhì)及其應(yīng)用前景。

背景技術(shù)

以微生物的代謝產(chǎn)物或者從微生物中分離得到的活性物質(zhì)開發(fā)生物源農(nóng)藥是新農(nóng)藥創(chuàng)制的研究熱點和方向之一。例如具有殺蟲活性的阿維菌素、具有殺菌活性的井岡霉素和具有除草活性的雙丙氨膦（Bialaphos，鏈霉菌產(chǎn)生）等。

細(xì)交鏈孢菌酮酸（Tenuazonic?acid）最初是在1957年Rosett等從Alternaria?tenuis培養(yǎng)濾液中分離得到，結(jié)構(gòu)由Stickings于1959年確定。其后，在A.?longipes，A.?linicola，A.?brassicicola，A.?RaphaniAspergillus，sp.，Pyricularia?oryzae，Phoma?sorghina中都有人分離得到該物質(zhì)。

關(guān)于細(xì)交鏈孢菌酮酸，是鏈格孢菌（Alternania）分泌的一種毒素，具有一定的抗腫瘤、抗病毒及除草活性，也作為一種除草劑的先導(dǎo)引起人們的廣泛關(guān)注。強(qiáng)勝等人報道了其對雜草致病性的廣譜性和對某些作物的安全性，顯示了其開發(fā)為微生物源除草劑的潛力；秦建春等人報道了其對蝦卵Brine?shrimp致死生測，顯示了較高的細(xì)胞毒活性性。但是，目前沒有人報道其對植物病原菌的抑制作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種繡線菊內(nèi)生真菌發(fā)酵物中分離鑒定出抑菌活性物質(zhì)---細(xì)交鏈孢菌酮酸，該物質(zhì)具有抑制植物病原菌的活性，在制備微生物源殺菌劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明繡線菊內(nèi)生真菌發(fā)酵物中分離鑒定出抑菌活性物質(zhì)---細(xì)交鏈孢菌酮酸，其結(jié)構(gòu)式為：

?分子式為C₁₀H₁₅NO₃?，分子量為197。

經(jīng)申請人所進(jìn)行的鑒定及生物活性實驗證明，細(xì)交鏈孢菌酮酸具有抑制植物病原菌的活性。在100μg/mL濃度下對茄褐紋病菌、梨黑星病菌和蘋果腐爛病菌的抑制率分別為95.9%、77.6%、100.0%，顯示了其開發(fā)為微生物源殺菌劑的潛力。

附圖說明

圖1是細(xì)交鏈孢菌酮酸在100μg/mL濃度下對茄褐紋病菌的菌絲抑制實驗圖。

圖2為細(xì)交鏈孢菌酮酸在100μg/mL濃度下對梨黑星病菌的菌絲抑制實驗圖。

圖3為細(xì)交鏈孢菌酮酸在100μg/mL濃度下對蘋果腐爛病菌的菌絲抑制實驗圖。

圖4是細(xì)交鏈孢菌酮酸核磁共振¹H?NMR譜圖。

圖5是細(xì)交鏈孢菌酮酸核磁共振¹³C?NMR譜圖。

圖6是細(xì)交鏈孢菌酮酸核磁共振H-H?COSY譜圖。

圖7是細(xì)交鏈孢菌酮酸核磁共振HSQC譜圖。

圖8是細(xì)交鏈孢菌酮酸高分辨質(zhì)譜圖。

本發(fā)明所述細(xì)交鏈孢菌酮酸的抗菌試驗如下：

1.植物病原真菌

蘋果腐爛病菌，茄褐紋病菌，梨黑星病菌；

2.病原微生物的培養(yǎng)

用接種針挑取少量病原菌的斜面培養(yǎng)物，分別接入馬鈴薯葡萄糖瓊脂固體培養(yǎng)基平板活化，在（28±1）℃恒溫箱中培養(yǎng)5天；

3.抑制菌絲生長速率法測定抗菌活性

在100?mL的無菌三角瓶中，配制含有抑菌活性物質(zhì)的無菌混合培養(yǎng)基（最終濃度為100?μg/mL），取10mL置于直徑為9?cm無菌培養(yǎng)皿內(nèi)制成平板，冷卻后在每個培養(yǎng)基平面放入供試病原菌菌餅（直徑為6?mm），菌餅的菌絲面貼在培養(yǎng)基表面，將平板置于28±1?℃培養(yǎng)48-96?h。采用十字交叉法測定菌落生長直徑，用下述公式計算抑制率：

。

表1是抑菌活性物質(zhì)在100μg/mL濃度下對茄褐紋病菌、梨黑星病菌和蘋果腐爛病菌的菌絲抑制實驗數(shù)據(jù)；

?

?由圖1可見，細(xì)交鏈孢菌酮酸對茄褐紋病菌的抑制作用；由圖2可見，細(xì)交鏈孢菌酮酸對梨黑星病菌的抑制作用；由圖3可見，細(xì)交鏈孢菌酮酸對蘋果腐爛病菌的抑制作用。

具體實施方式

1、抑菌活性物質(zhì)提取分離：

1）繡線菊內(nèi)生真菌XXB07在28℃,160r/min搖床中發(fā)酵培養(yǎng)5天，發(fā)酵液通過抽濾得到發(fā)酵濾液；

2）將發(fā)酵濾液用正丁醇萃取3次，合并正丁醇相，?60℃減壓濃縮得到正丁醇萃取物；