[發明專利]一種迷迭香組培體系的建立方法

無效

• 申請號: 201510097701.6
• 申請日: 2015-03-05
• 公開（公告）號: CN104737906A
• 公開（公告）日: 2015-07-01
• 發明（設計）人: 羅煥榮
• 申請（專利權）人: 羅煥榮
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 玉林市振盛專利商標代理事務所 45109
• 代理人: 吳安儀

技術領域

????本發明涉及農業生物技術中植物組織培養的方法，具體地說，涉及一種迷迭香組培體系的建立方法。

背景技術

迷迭香（Rosemarinus?officinalis）系唇形科迷迭香屬多年生常綠亞灌木，原產于環地中海沿岸,現在歐洲,美國,中國等地區均有分布，全株富含抗氧化成分，主要包括鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酚、熊果酸、迷迭香酸等，具有抗炎、抗菌抗病毒、抗腫瘤、免疫調節、抑制尿酸生成等多方面的藥理作用,主要應用在食品保藏技術,化妝品和醫藥等方面。比起傳統的化學防腐劑,迷迭香提取物具有價格低廉、高效安全和豐富收集途徑等優勢,尤其是在肉類和富油食品的安全衛生與保存的應用上。

我國對迷迭香引種栽培起步較晚,大約在20世紀70年代末和80年代初期,開始作為香料作物引進,并取得成功,目前在北京、貴州、新疆、云南等地均有種植。我國科學家對于迷迭香的進一步研究己取得一定的成績,但是仍然存在著優良品種引進與馴化的相關問題,對于適宜我國大部分地區環境生長的品種開發以及迷迭香的大量快速繁殖的報道仍然較少。迷迭香繁殖較為困難,其主要繁殖方式包括種子繁殖、扦插繁殖以及壓條繁殖等。利用種子繁殖時,其種子存在發芽難和發芽率低的問題,大大減少了成活率及成苗率，成本較高,收益少；利用扦插和壓條的方式進行繁殖時,其扦插的枝條不易生根或者較為緩慢,不容易成活,也造成了迷迭香成苗率的問題。因此，急需建立了系統的迷迭香組織培養植株再生體系，以提高其繁殖速度和規模,從而實現迷迭香種苗的工廠化生產。

發明內容

????本發明的目的在于提供出一種迷迭香組培體系的建立方法，本發明以帶芽莖段為外植體，經過誘導、增殖、生根以及煉苗移栽等步驟成功地獲得了迷迭香組織培養再生植株,建立了系統的迷迭香組織培養植株再生體系，從而實現了本發明的目的。

??本發明的一種迷迭香組培體系的建立方法，包括以下的步驟：

（1）外植體消毒：采集回來的莖段以淸水沖洗10～30min后并用毛刷輕輕刷去上面的雜質,在超凈工作臺中用70%～80%乙醇溶液中消毒10～30s，后用無菌水洗3～5次，再用5%～10%安替富民溶液漂洗5～10min，用無菌水沖洗4～6次后用無菌濾紙吸去水分后備用。

（2）誘導培養：將步驟（1）消毒好的莖段按成對芽為一個單位切成約1.5cm長的莖段，剪去莖段底部處理過程中褐化部分，接種到誘導培養基中進行芽誘導培養。接種后先在25～28℃條件下全暗培養3～10天，然后置于每天光照10～14小時，光照強度為2000～3000lx，置于培養溫度為25～28℃的條件下培養直至形成不定芽。

???（3）增殖培養：將步驟（2）培養得到的芽苗，從基部切取芽并轉入增殖培養基上進行繼代培養，接種后先在25～28℃條件下全暗培養2～3天，然后置于每天光照11～15小時，光照強度為2000～3000lx，置于培養溫度為25～28℃的條件下培養，30天繼代一次。

???（4）生根培養：將步驟（2）或（3）的芽苗長至1.5～2.5cm高時，切割成單芽并接種到生根培養基上進行生根培養，接種后先在25～28℃條件下全暗培養2～3天，然后置于每天光照14～16小時，光照強度為3000～5000lx，培養溫度為25～28℃的條件下培養至生根。

（5）煉苗移栽：將長至3～4cm的生根試管苗的培養瓶瓶蓋打開并置于自然光照下煉苗5～7天后，將試管苗從培養瓶中取出，洗掉根部培養基，盡量不傷害根部，栽入由泥炭土:蛭石＝1：1混合成的基質中于每天光照10～12小時，光照強度為3000～5000lx，培養溫度為25～28℃，空氣濕度為80%～90%的培養箱中培養5～7天，然后移栽定植于大田中。

???上述步驟（2）所述的誘導培養基為：MS+0.2～1.0mg/L?6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

???上述步驟（3）所述的增殖培養基為：MS+0.01～0.2mg/L?NAA+0.2～2.0mg/L?6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。

????上述步驟（4）所述的生根培養基為：MS+0.5～3.0mg/L?IBA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L瓊脂，pH為5.4～5.8。