[發(fā)明專利]抗人IL-17單克隆抗體

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510097117.0
• 申請(qǐng)日: 2015-03-05
• 公開（公告）號(hào): CN105315371B
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉志剛;沈世杰;劉玉蘭;郭晶晶;郝小勃
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京百特美博生物科技有限公司;北京智仁美博生物科技有限公司;智翔（上海）醫(yī)藥科技有限公司;重慶智翔金泰生物制藥有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/24
• 分類號(hào): C07K16/24;A61K39/395;A61P37/02;A61P17/06;A61P29/00;A61P19/02;A61P19/08
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11204
• 代理人: 王達(dá)佐;洪欣

本發(fā)明公開了一種利用噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)篩選并利用基因工程方法制備的新型抗人IL?17的單克隆抗體或其片段，其特征在于對(duì)人IL?17具有高親和力。本發(fā)明抗體可以是全長(zhǎng)抗體、基本上完整的抗體、Fab片段、F(ab')2片段或單鏈Fv片段。該單克隆抗體或其片段用于治療由人IL?17介導(dǎo)的自身免疫系統(tǒng)疾病中的用途，所述的自身免疫系統(tǒng)疾病包括但不局限于銀屑病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或強(qiáng)直性脊柱炎。本發(fā)明并且公開了包含編碼該單克隆抗體或其片段的核苷酸載體、宿主細(xì)胞、制備和純化方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明為基因工程抗體藥物領(lǐng)域，特別是抗人IL-17的單克隆抗體領(lǐng)域。本發(fā)明涉及人源性功能性抗人IL-17單克隆抗體，以及這類抗體在治療人IL-17介導(dǎo)的疾病中的用途。

背景技術(shù)

白細(xì)胞介素17(IL-17)家族目前包括IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E和IL-17F六種細(xì)胞因子。IL-17家族的成員與任何其它已知的細(xì)胞因子沒(méi)有序列相似性，而且家族成員之間的序列相似性也比較低(Gaffen SL,Nat.Rev.Immunol.2009Aug；9(8):556-67)。 IL-17家族成員的功能主要是參與免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)。白細(xì)胞介素IL-17A(以下簡(jiǎn)稱IL-17)是 20-30kD的同源二聚體糖蛋白,其主要由活化的CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生并作為促炎細(xì)胞因子起作用。IL-17由活化的T細(xì)胞在炎性位點(diǎn)分泌,而不在體循環(huán)中分泌。IL17具有多種生物學(xué)特性,包括上調(diào)黏附分子并在多種細(xì)胞類型包括滑膜細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中誘導(dǎo)產(chǎn)生大量炎性細(xì)胞因子和趨化因子。同樣，IL-17通過(guò)誘導(dǎo)趨化因子的釋放誘導(dǎo)嗜中性粒細(xì)胞聚集到炎性位點(diǎn)上，刺激前列腺素和金屬蛋白酶的產(chǎn)生，并抑制蛋白聚糖的合成。此外，IL-17在造血祖細(xì)胞的成熟中起重要作用。IL-17在不同的器宮和組織包括肺、關(guān)節(jié)軟骨、骨、腦、造血細(xì)胞、腎、皮膚和腸中具有信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能。因此，由IL-17A/Th17介導(dǎo)的免疫反應(yīng)是全身性的，由此引發(fā)的炎癥反應(yīng)主要表現(xiàn)為中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。

大量的研究已經(jīng)證實(shí)IL-17的增加與多種疾病有關(guān)，包括呼吸道炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 (RA)、骨關(guān)節(jié)炎、骨侵蝕、腹膜內(nèi)膿腫與粘連炎癥(IBD)、同種異體移植排斥、牛皮癬、某些類型的癌、血管發(fā)生、動(dòng)脈粥樣硬化和多發(fā)性硬化(MS)等(Witkowski等人，Cell.Mol.Life Sci.61:567-579,2004)。而且，IL-17在膠原基質(zhì)分解、炎癥及關(guān)節(jié)損傷等方面與IL-1b具有相對(duì)獨(dú)立的效應(yīng)，而且IL-17具有與TNF-a協(xié)同擴(kuò)大炎癥的生物學(xué)效應(yīng)。進(jìn)一步的研究證實(shí)，通過(guò)結(jié)合IL-17的特異性抗體或可溶性IL17受體阻斷IL-17的體內(nèi)生物學(xué)活性時(shí)，可以有效減少了多種動(dòng)物關(guān)節(jié)炎模型中的炎癥和骨侵蝕。因此，IL-17成為治療 RA和其它自身免疫性疾病的新靶標(biāo)，而且由于IL17主要集中于炎癥部位，因而靶向IL17 的藥物可能較靶向其它參與體循環(huán)的促炎細(xì)胞因子(如TNF)等具有潛在的更高安全性。

目前歐盟和美國(guó)FDA都已經(jīng)批準(zhǔn)用Novartis公司的Cosentyx治療中重度斑塊狀銀屑病成人患者，而Cosentyx的活性成分 是secukinumab，是一種IL-17的單抗。但是本領(lǐng)域仍然需要更多適于治療患者的改善的抗IL-17抗體。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種新型抗人IL-17的單克隆抗體或其片段，編碼該單克隆抗體或其片段的多核苷酸的載體、宿主細(xì)胞、制備和純化該抗體的方法及臨床應(yīng)用。由本發(fā)明涉及的抗體基因可變區(qū)的序列，可構(gòu)建全長(zhǎng)的抗體分子作為藥物用于臨床上由人IL-17介導(dǎo)的自身免疫系統(tǒng)疾病使用。這些適應(yīng)癥包括但不局限于下列：銀屑病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或強(qiáng)直性脊柱炎。

本發(fā)明構(gòu)建了大容量的天然人源噬菌體抗體庫(kù)，從中篩選得到了全人源抗IL-17單克隆抗體。

本發(fā)明的抗體為全人源的單克隆抗體，拮抗至少一種與IL-17或其部分相關(guān)的體外或體內(nèi)生物活性。