[發明專利]出血熱相關病原體鑒別基因芯片的制備和用途

有效

• 申請號: 201510096044.3
• 申請日: 2015-03-04
• 公開（公告）號: CN105087824B
• 公開（公告）日: 2019-10-25
• 發明（設計）人: 張嚴峻;顏浩;王升啟;劉琪琦;陳蘇紅;劉志紅;孫曉彥
• 申請（專利權）人: 浙江省疾病預防控制中心;中國人民解放軍軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6837;C40B40/06;C12R1/93
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• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種出血熱相關病原體鑒別基因芯片，其制備方法包括制備特異性引物，制備病原體特異性寡核苷酸探針，制備寡核苷酸芯片，建立RT?PCR體系，建立雜交體系及信號檢測方法。利用本發明制備的基因芯片可同時甄別16種出血熱相關病原微生物，包括扎伊爾型埃博拉病毒、蘇丹型埃博拉病毒、馬爾堡病毒、拉沙病毒、鳩寧病毒、馬秋波病毒、裂谷熱病毒、克里米亞?剛果出血熱病毒、瘧原蟲、漢坦病毒、發熱伴血小板減少綜合征病毒、登革病毒、黃熱病毒、基孔肯雅病毒、A型流感病毒、B型流感病毒，具有快速、準確、高通量、高靈敏度的特點，可為出血熱病原的診斷、衛生監督及傳染病防控提供一種新的技術手段。

技術領域

本發明涉及十六種出血熱相關病原體核酸檢測基因芯片的制備和用途，屬基因芯片檢測技術領域。

背景技術

病毒性出血熱(Viral Hemorrhagic Fever，VHF)是一組由不同類型病毒引起，以發熱、出血為主要臨床癥狀的一組自然疫源性疾病。出血熱病毒主要分布在絲狀病毒科(Filoviridae)、沙粒病毒科(Arenaviridae)、布尼亞病毒科(Bunyaviridae)和黃病毒科(Flaviviridae)。可引發出血熱的病毒種類繁多，其中在全球范圍內影響較大的包括：絲狀病毒科埃博拉病毒、馬爾堡病毒、沙粒病毒科拉沙病毒、鳩寧病毒、馬秋波病毒、布尼亞病毒科裂谷熱病毒、克里米亞-剛果出血熱病毒、漢坦病毒、發熱伴血小板減少綜合征病毒、黃病毒科登革病毒、黃熱病毒、披膜病毒科基孔肯雅病毒等。該類疾病發病初期的臨床表現并不特異，類似流感、瘧疾，常可發展到皮下、體腔和內臟出血，隨之而來的是休克、昏迷和神經功能障礙等，病死率高，危害嚴重。

出血熱病毒宿主和媒介類型廣泛，傳播方式多種多樣，隨著經濟全球化的進展，各地區商貿往來和人員交流更加快捷頻繁，宿主和媒介分布的地理界線被打破，從而導致疫情流行范圍的擴大和突然暴發，也增加了發生輸入性疫情的可能。2014年西非暴發的埃博拉出血熱是由埃博拉病毒引起的急性出血性傳染病，自2014年3月報告出現首批病例到12月24日共有19497人疑似或確認感染，導致7588人死亡，是1976年首次發現埃博拉病毒以來發生的最大且最復雜的埃博拉疫情，本次疫情出現的病例和死亡數字超過了所有其它疫情的總和。WHO已將埃博拉病毒列為對人類危害最嚴重的病毒之一，其平均病死率約為50％，在以往疫情中出現的病死率從25％到90％不等，目前發現有五個亞型，其中扎伊爾型和蘇丹型病死率最高，分別可達88.8％和53.2％。2014年中國廣東暴發登革熱，至12月1日廣東累計報告登革熱病例45053例。據估計，全球每年實際感染登革病毒的病例高達3.9億，其中超過2萬人因嚴重感染而死亡。不僅既往發現的病毒疫情不時暴發，引起新發傳染病的新病毒也不斷被發現。2010年我國發現具有重要公共衛生意義的新型布尼亞病毒——發熱伴血小板減少綜合征病毒(Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome Virus，SFTSV)，該病毒感染人體引起的發熱伴血小板減少綜合征，是一種以發熱伴白細胞、血小板減少和多臟器功能損傷為主要臨床表現的新發傳染病，死亡率高達30％。目前已在山東、湖北、浙江、江蘇等多個省市發現SFTSV感染病例，2011-2013年，美國密蘇里州、日本、韓國也相繼報道發現有經蜱蟲叮咬傳播的類似SFTSV病毒感染病例，SFTSV感染已逐漸成為全球性的重要公共衛生問題。

由于病毒性出血熱病死率高，傳播途徑廣，極易造成社會恐慌，美國疾病預防控制中心將出血熱病毒列為一類生物武器，因此病毒性出血熱的防控和治療手段顯得尤為重要。但目前已商業化的出血熱疫苗只有腎綜合征出血熱疫苗和黃熱病疫苗，另外尚有阿根廷出血熱疫苗和裂谷熱疫苗處于臨床試驗階段；在藥物治療方面，尚無針對病毒性出血熱的特效藥物?！霸\”、“防”、“治”三個環節構成了完整的疾病預防控制鏈，其中“診”不僅是其中不可缺少的關鍵一環，而且也是有效防治的前提。在病毒性出血熱的高發和臨床治療手段的缺乏情況下，準確有效的診斷病原體顯得尤為重要。