[發(fā)明專利]絲蛋白支架材料及其制備方法有效

申請?zhí)枺?/td>	201510092836.3	申請日：	2015-03-02
公開（公告）號：	CN104971386B	公開（公告）日：	2017-06-16
發(fā)明（設計）人：	呂強;寧洪艷	申請（專利權）人：	絲納特（蘇州）生物科技有限公司
主分類號：	A61L31/04	分類號：	A61L31/04;A61L31/14
代理公司：	北京集佳知識產(chǎn)權代理有限公司11227	代理人：	常亮
地址：	215000 江蘇省蘇州市蘇州工業(yè)園***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	蛋白支架材料及其制備方法
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【說明書】：

技術領域

本發(fā)明涉及組織工程技術領域，尤其是涉及一種絲蛋白支架材料及其制備方法。

背景技術

各種創(chuàng)傷、疾病等引起的組織器官的缺損、病變等是影響人類健康的一大問題。目前，臨床上常采用器官移植的方法對組織器官的缺損進行治療。組織、器官移植中供體不足、組織和器官的缺損修復和功能重建等問題，已成為生命科學領域研究亟需解決的問題。組織工程基本原理是利用三維支架材料模擬體內(nèi)生理環(huán)境，對細胞進行體外培養(yǎng)，然后將細胞-支架材料復合物植入體內(nèi)替代病變的組織器官，以達到創(chuàng)傷修復和功能重建的目的。

而構建具有修復大組織和復雜器官的功能性生物材料是急需解決的問題。大組織、復雜器官不像簡單的薄層組織可以通過小分子擴散獲得營養(yǎng)物質和氧氣，它們需要通過龐大的血管系統(tǒng)才能獲得營養(yǎng)物質和氧氣。微血管系統(tǒng)是由單層內(nèi)皮細胞組成，營養(yǎng)物質和氧氣可通過內(nèi)皮細胞擴散到組織中。修復損傷的大組織和復雜器官的生物材料必須具有促血管形成的能力才能使大組織和復雜器官具有生物功能。

現(xiàn)有技術的解決方案主要有兩種：一種方法是以材料為基礎的，現(xiàn)已開發(fā)應用的作為組織工程支架的生物醫(yī)用材料主要分為兩大類：合成生物材料與天然生物材料。硅橡膠、聚氨酯等合成材料在生物相容性、理化性能、降解速率的控制及緩釋性等方面尚有許多不足，部分降解產(chǎn)物有一定的毒性，不利于細胞黏附和識別，作為組織工程支架材料推廣使用仍有諸多關鍵問題需要繼續(xù)解決。而天然生物材料的機械性能不易控制，但其生物相容性優(yōu)異，種類繁多，來源廣泛，在組織的再生修復領域逐漸獲得越來越廣泛的應用。另一種方法是以細胞為基礎的，體外構建支架再接種上內(nèi)皮細胞，體外培養(yǎng)再移植入體內(nèi)前誘導血管化，但這種方法需要生長因子或黏著蛋白或細胞外基質蛋白或細胞共培養(yǎng)，培養(yǎng)時間長，過程繁瑣，花費較高，不能量化。

蠶絲中富含的絲蛋白以其特殊的生物學特性和良好的人體親和性越來越受到人們的關注。絲蛋白的構象主要分為：無規(guī)結構、α-螺旋和β-折疊。而現(xiàn)有技術中鹽析法和甲醇等有機溶劑誘導制備的絲蛋白多孔支架存在硬度高，結晶度高，多孔支架孔壁表面結構無法調控的問題，不適用于內(nèi)皮細胞的增殖及血管形成。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術問題在于提供一種絲蛋白支架材料的制備方法，本發(fā)明提供的絲蛋白支架材料的制備方法制備得到的絲蛋白支架材料生物降解性好、孔隙率高、可以起到促進血管生成的作用。

本發(fā)明提供了一種絲蛋白支架材料的制備方法，包括：

A)將絲蛋白溶液濃縮，得到濃縮后溶液，所述濃縮后溶液中絲蛋白的質量濃度為15％～35％；

B)將步驟A)得到的濃縮后溶液稀釋、熱處理得到水凝膠，所述水凝膠中絲蛋白的質量濃度為0.2％～0.6％；

C)將步驟A)得到的濃縮后溶液和步驟B)得到的水凝膠混合，得到混合液；調節(jié)混合液pH值、攪拌、冷凍、干燥、得到支架材料；所述pH值為3～4。

優(yōu)選的，所述步驟A)濃縮溫度為0～90℃。

優(yōu)選的，所述步驟A)濃縮時間為1～168h。

優(yōu)選的，所述步驟B)熱處理溫度為50℃～70℃。

優(yōu)選的，所述步驟C)混合液中絲蛋白的質量濃度為1％～4％。

優(yōu)選的，所述步驟C)調節(jié)pH值為用酸調節(jié)pH值，所述酸選自鹽酸、和甲酸中的一種。

優(yōu)選的，所述步驟C)攪拌時間為1～10min。