[發明專利]一種鑒定梅山豬或其肉制品的專用引物、方法和試劑盒

有效

• 申請號: 201510088708.1
• 申請日: 2015-02-26
• 公開（公告）號: CN104593519A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發明（設計）人: 史子學;馬志永;張國平;朱建忠;王勃;陳建生;陸林根;衛金良;唐賽涌;費瓊慧
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所;上海市嘉定區農業委員會;上海市嘉定區梅山豬育種中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;沈利

技術領域

本發明涉及生物領域，具體涉及一種鑒定梅山豬或其肉制品的專用引物、方法和試劑盒。

背景技術

梅山豬原產于太湖流域的上海市嘉定、寶山、松江等區縣和江蘇的昆山、太倉等市縣，是太湖豬中的典型代表，有肉質好、耐粗飼、抗病力強等優良特性。嘉定區的梅山豬品種其肌肉鮮嫩、肌纖維細而密，含水量較少，肌肉脂肪豐富，呈大理石狀，俗稱“五花肉”，風味醇厚，細膩酥軟。隨著人們生活水平的提高，對畜禽產品的質量要求越來越高，許多以追求高產為目的培育的外三元等品種在國內越來越不受歡迎，取而代之的是豬肉市場消費追求多樣化、精細化、肉質高品質化。梅山豬因肉質鮮美、香甜濃香而受到上海市民青睞，盡管價格比較高卻供不應求，導致市場上極易出現假冒梅山豬肉及其品牌或以次充好、以假亂真的銷售行為。但目前尚沒有鑒定梅山豬肉及其肉制品的方法可以有效地保護正宗梅山豬肉及其肉制品的質量品質和品牌形象。

目前，制定了以活體豬為檢測對象的鑒別梅山豬的地方性標準方法，但是對梅山豬宰殺后分割肉及其他肉制品就不能使用地方標準方法進行鑒定了。而傳統的鑒別方法則通過測定豬胴體和肉質特征來評價生鮮肉及其肉制品品質，包括瘦肉率、嫩度、pH值、肉色等區別肉品質好壞。但由于飼養條件和豬個體存在差異，且對測試豬生長日齡和取樣部位有具體要求，使得檢測人員的工作十分不便并且使檢測結果容易發生較大的誤差，導致檢測結果缺乏重復性和準確性。此外，由于肉質指標大多沒有統一的數值范圍，個體差異也比較明顯，因此肉質指標也不能作為鑒定梅山豬的依據。目前，豬全基因組測序技術雖然可以鑒別不同品種、甚至不同個體的豬，但需要檢測的基因數目很多，成本大，不可能在實際日常商業活動中推廣。而若只檢測不同品種豬個別基因，則不能區分轉基因豬肉制品和純種豬肉制品。

DNA分子標記是基于基因組DNA序列豐富的多態性發展而來的一種遺傳標記，可直接反映DNA水平上的差異，具有其它遺傳標記所不具有的優點，如變異穩定豐富、信息量大、受環境因素影響小、不受取材部位、發育時期限制、可隨時檢測、操作方便等，故可以用于動植物等品種鑒定、遺傳育種等領域，近年來得到了迅速的發展。ISSR是Zietkiewicz等于1994創建的一類在PCR反應基礎上的DNA分子標記技術，它是根據基因組內廣泛存在的微衛星序列設計的單一引物對基因組進行擴增的標記系統，它對兩個序列相同但方向相反的簡單重復序列(SSR)之間的區域進行擴增。ISSR技術和PCR技術聯合使用具有很高的特異性和靈敏度且準確快速，近年來在品種鑒定、種質資源和遺傳多樣性研究中得到了廣泛應用：申請號為201310209120.8的發明專利公開了利用ISSR分子標記技術鑒別四川白鵝真偽的方法。其中共用到3個ISSR標記，形成了11個鵝品種(系)DNA用三個遺傳標記分別PCR擴增后的標準電泳圖譜，用于鑒別被鑒定的鵝群是否是真正的四川白鵝。中國專利CN103484555A(公開日2014.01.01)公開了利用ISSR分子標記法對甘薯品種真實性進行鑒別的方法，成功構建的甘薯品種單一引物的ISSR指紋圖譜，使得甘薯品種真實性的鑒定簡便、快捷、重復性和穩定性好。中國專利CN102839219A(公開日2012.12.26)公開了一種霍亂弧菌流行株分子鑒定方法及其ISSR-PCR引物及試劑盒，通過提供對霍亂弧菌流行株具有特異性分子鑒定作用的1條ISSR-PCR引物來檢測某一分離獲得的霍亂弧菌菌株基因組DNA，進而確定該霍亂弧菌菌株是否為流行株。中國專利CN101956016A(公開日2011.01.26)一種適于水稻品種真實性鑒定的ISSR指紋圖譜構建方法，提供一種快速、準確的水稻品種的ISSR指紋圖譜構建方法及其應用。中國專利CN103215365A(公開日2013.07.24)公開了一種陸川豬及其肉制品的DNA分子鑒定方法，其中ISSR-PCR所用的引物為WM14、WM12和WM29。最終繪制了7張陸川豬及其肉制品的電泳圖譜，建立了陸川豬及其肉制品的DNA指紋圖譜，可作為區分鑒定陸川豬及其肉制品的依據。

但國內外還未見利用分子鑒定方法鑒定梅山豬及其肉制品的方法，建立可以區分梅山豬制品及其他品種豬肉制品的方法，以此來解決涉及梅山豬及其肉制品的假冒銷售糾紛，從而有效保護梅山豬地方品種的市場地位和品牌形象。

發明內容

本發明為了克服現有技術中缺乏DNA分子鑒定方法鑒別梅山豬及其肉制品的鑒定方法的缺陷，提供一種操作簡單、結果準確、快速高效、利于實際應用的鑒定梅山豬或其肉制品的方法和該方法中所應用的專用引物及試劑盒，所述的方法能夠快速、準確地鑒定梅山豬。