[發(fā)明專利]核酸擴(kuò)增方法、核酸提取用設(shè)備、核酸擴(kuò)增反應(yīng)用盒、以及核酸擴(kuò)增反應(yīng)用套件

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510088610.6
• 申請日: 2015-02-26
• 公開（公告）號(hào): CN104877989A
• 公開（公告）日: 2015-09-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 花村雅人
• 申請（專利權(quán)）人: 精工愛普生株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C12M1/00
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 李洋;舒艷君

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及核酸擴(kuò)增方法、核酸提取用設(shè)備、核酸擴(kuò)增反應(yīng)用盒、以及核酸擴(kuò)增反應(yīng)用套件。

背景技術(shù)

近年來，由于基因的利用技術(shù)的發(fā)展，基因診斷、基因治療等利用了基因的醫(yī)療備受矚目。另外，即使在農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)領(lǐng)域中，也開發(fā)有較多在品種辨別、品種改良使用了基因的方法。作為用于利用基因的技術(shù)，廣泛普及有PCR(Polymerase?Chain?Reaction聚合酶鏈反應(yīng))等技術(shù)。如今，PCR在生物體的信息解析中成為必不可缺的技術(shù)。PCR是對(duì)含有成為擴(kuò)增的對(duì)象的核酸(靶核酸)以及試劑的溶液(反應(yīng)液)實(shí)施熱循環(huán)，從而使靶核酸擴(kuò)增的方法。作為PCR的熱循環(huán)，通常是以兩個(gè)梯度或者三個(gè)梯度的溫度實(shí)施熱循環(huán)的方法。

另一方面，現(xiàn)狀是醫(yī)療領(lǐng)域中以流行性感冒為代表的感染癥的診斷使用免疫層析試劑盒等簡易檢查套件成為主流。但是，在上述的簡易檢查中，存在精度不夠的情況，從而希望將能夠期待更高的檢查精度的PCR應(yīng)用于感染癥的診斷。另外，醫(yī)療機(jī)構(gòu)的普通門診患者等由于診察的時(shí)間受限的關(guān)系，所以將檢查所使用的時(shí)間被限制在短時(shí)間內(nèi)。因此，現(xiàn)狀是例如流行性感冒的檢查犧牲檢查的精度，通過簡易的免疫層析試劑盒等的檢查而實(shí)現(xiàn)短時(shí)間化。

根據(jù)上述的情況，在醫(yī)療領(lǐng)域中，為了實(shí)現(xiàn)基于能夠期待更高的精度的PCR進(jìn)行的檢查，需要縮短反應(yīng)所需的時(shí)間。作為用于短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行PCR的反應(yīng)的裝置，例如在專利文獻(xiàn)1中公開了一種生物體試樣反應(yīng)裝置，其使填充有反應(yīng)液與不和反應(yīng)液混和且比重比反應(yīng)液小的液體的生物體試樣反應(yīng)用芯片在水平方向的旋轉(zhuǎn)軸的周圍旋轉(zhuǎn)，從而使反應(yīng)液移動(dòng)而實(shí)施熱循環(huán)(專利文獻(xiàn)1)。另外，作為PCR的一個(gè)方法，公開有利用了磁性微球的方法(專利文獻(xiàn)2)、使用磁性微球作為液滴的移動(dòng)機(jī)構(gòu)，使基板上的溫度變化區(qū)域中的液滴移動(dòng)從而進(jìn)行PCR的熱循環(huán)的方法(專利文獻(xiàn)3)等。

專利文獻(xiàn)1：日本特開2009-136250號(hào)公報(bào)

專利文獻(xiàn)2：日本特開2009-207459號(hào)公報(bào)

專利文獻(xiàn)3：日本特開2008-012490號(hào)公報(bào)

在專利文獻(xiàn)2、3所記載的以使核酸吸附于微粒的方式快速地進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)的方法中，后續(xù)有用于從微粒溶出核酸的工序。存在欲在短時(shí)間內(nèi)高效地進(jìn)行本工序的迫切期望。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明是鑒于上述情況而完成的，其目的在于提供溶出效率更高的核酸擴(kuò)增方法、能夠?qū)崿F(xiàn)該方法的核酸提取用設(shè)備、核酸擴(kuò)增反應(yīng)用盒、以及核酸擴(kuò)增反應(yīng)用套件。

本發(fā)明的一實(shí)施方式所涉及的核酸擴(kuò)增方法的特征在于，包括：吸附工序，在該工序中，向含有核酸的試樣混合吸附液以及微粒，使上述核酸吸附于上述微粒；清洗工序，在該工序中，利用第一清洗液對(duì)吸附了上述核酸的微粒進(jìn)行清洗；溶出工序，在該工序中，對(duì)吸附了上述核酸的微粒施加超聲波，使吸附于上述微粒的核酸溶出于溶出液中；以及核酸擴(kuò)增工序，在該工序中，對(duì)上述溶出液中的核酸進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)。

本發(fā)明的其他的實(shí)施方式所涉及的核酸擴(kuò)增方法的特征在于，包括：吸附工序，在該工序中，向含有核酸的試樣混合吸附液以及微粒，使上述核酸吸附于上述微粒；清洗工序，在該工序中，利用第二清洗液對(duì)吸附了上述核酸的微粒進(jìn)行清洗；清洗工序，在該工序中，利用第一清洗液對(duì)由上述第二清洗液清洗后的吸附了上述核酸的微粒進(jìn)行清洗；溶出工序，在該工序中，對(duì)吸附了上述核酸的微粒施加超聲波，使吸附于上述微粒的核酸溶出于溶出液中；以及核酸擴(kuò)增工序，在該工序中，使上述核酸擴(kuò)增。

在上述任意的核酸擴(kuò)增方法中，上述核酸可以為核糖核酸(RNA)，包括對(duì)溶出于上述溶出液中的上述核糖核酸進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄從而合成cDNA的逆轉(zhuǎn)錄工序，在上述核酸擴(kuò)增工序中進(jìn)行擴(kuò)增的核酸為所合成的上述cDNA。

本發(fā)明的一實(shí)施方式所涉及的核酸提取用設(shè)備的特征在于，具有：管，其具有長邊方向，并在內(nèi)部依次具備由油構(gòu)成的第一柱塞、由與油相互分離并對(duì)結(jié)合了核酸的微粒進(jìn)行清洗的第一清洗液構(gòu)成的第二柱塞、由油構(gòu)成的第三柱塞、由與油相互分離并從結(jié)合了上述核酸的微粒溶出上述核酸的溶出液構(gòu)成的第四柱塞、以及由油構(gòu)成的第五柱塞；超聲波產(chǎn)生部，其用于對(duì)結(jié)合了上述核酸的微粒施加超聲波；以及容器，其能夠與上述管的配置有上述第一柱塞的一側(cè)連接以及連通，并含有使上述核酸吸附于上述微粒的吸附液。