[發明專利]鑒定或輔助鑒定香蕉枯萎病菌的成套引物及應用

有效

• 申請號: 201510083472.2
• 申請日: 2015-02-16
• 公開（公告）號: CN104611451B
• 公開（公告）日: 2017-01-18
• 發明（設計）人: 楊臘英;黃俊生;郭立佳;汪軍;劉磊;梁昌聰;王國芬;陳平亞;師雪茹
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院環境與植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司11245
• 代理人: 關暢,任鳳華

1.鑒定或輔助鑒定香蕉枯萎病菌的成套引物，其特征在于：所述成套引物由名稱為A的PCR引物對、名稱為B的PCR引物對和名稱為C的PCR引物對組成；

所述A由序列表中SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示的兩條單鏈DNA組成；所述B由序列表中SEQ?ID?No.3和SEQ?ID?No.4所示的兩條單鏈DNA組成；所述C由序列表中SEQ?ID?No.5和SEQ?ID?No.6所示的兩條單鏈DNA組成。

2.鑒定或輔助鑒定香蕉枯萎病菌的成套引物，其特征在于：所述成套引物由權利要求1所述A和權利要求1所述C組成。

3.鑒定或輔助鑒定香蕉枯萎病菌的成套引物，其特征在于：所述成套引物由權利要求1所述B和權利要求1所述C組成。

4.鑒定或輔助鑒定香蕉枯萎病菌的PCR引物對，其特征在于：所述PCR引物對為權利要求1所述C。

5.鑒定或輔助鑒定香蕉枯萎病菌的系統，其特征在于：所述系統為下述Hh-Kk中的任一種：

Hh、含有權利要求1所述成套引物的系統；

Ii、含有權利要求2所述成套引物的系統；

Jj、含有權利要求3所述成套引物的系統；

Kk、含有權利要求4所述C的系統。

6.根據權利要求5所述的系統，其特征在于：所述系統還包括DNA聚合酶。

7.鑒定或輔助鑒定香蕉枯萎病菌的方法，為下述H、I、J和K中的任一種：

H下述H1)或H2)：

H1)下述H11)和H12)：

H11)以待測生物樣品的核酸為模板，用權利要求1所述A進行PCR擴增得到PCR產物A1；以所述待測生物樣品的RNA或以RNA為模板轉錄得到的cDNA為模板，用權利要求1所述B進行PCR擴增得到PCR產物B1；以所述待測生物樣品的核酸為模板，用權利要求1所述C進行PCR擴增得到PCR產物C1；

H12)檢測H11)所述PCR產物A1、所述PCR產物B1和所述PCR產物C1的大小，如果所述PCR產物B1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR產物A1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR產物C1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品含有或候選含有尖孢鐮刀菌古巴專化型亞熱帶4號生理小種；如果所述PCR產物B1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR產物A1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR產物C1中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品含有或候選含有尖孢鐮刀菌古巴專化型4號生理小種，所述尖孢鐮刀菌古巴專化型4號生理小種不為尖孢鐮刀菌古巴專化型亞熱帶4號生理小種；如果所述PCR產物B1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR產物A1中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品含有或候選含有尖孢鐮刀菌古巴專化型，所述尖孢鐮刀菌古巴專化型不為尖孢鐮刀菌古巴專化型4號生理小種；如果所述PCR產物B1中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品不含或候選不含尖孢鐮刀菌古巴專化型；

H2)下述H21)和H22)：

H21)以待測生物樣品的核酸為模板，用權利要求1所述A進行PCR擴增得到PCR產物A2；以所述待測生物樣品的DNA為模板，用權利要求1所述B進行PCR擴增得到PCR產物B2；以所述待測生物樣品的核酸為模板，用權利要求1所述C進行PCR擴增得到PCR產物C2；

H22)檢測H21)所述PCR產物A2、所述PCR產物B2和所述PCR產物C2的大小，如果所述PCR產物B2中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR產物A2中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR產物C2中含有500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品含有或候選含有尖孢鐮刀菌古巴專化型亞熱帶4號生理小種；如果所述PCR產物B2中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR產物A2中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR產物C2中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品含有或候選含有尖孢鐮刀菌古巴專化型4號生理小種，所述尖孢鐮刀菌古巴專化型4號生理小種不為尖孢鐮刀菌古巴專化型亞熱帶4號生理小種；如果所述PCR產物B2中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR產物A2中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品含有或候選含有尖孢鐮刀菌古巴專化型，所述尖孢鐮刀菌古巴專化型不為尖孢鐮刀菌古巴專化型4號生理小種；如果所述PCR產物B2中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品不含或候選不含尖孢鐮刀菌古巴專化型；

I下述I1)和I2)：

I1)以待測生物樣品的核酸為模板，用權利要求1所述A進行PCR擴增得到PCR產物A1；以所述待測生物樣品的核酸為模板，用權利要求1所述C進行PCR擴增得到PCR產物C1；

I2)檢測I1)所述PCR產物A1和所述PCR產物C1的大小，如果所述PCR產物A1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR產物C1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品含有或候選含有尖孢鐮刀菌古巴專化型亞熱帶4號生理小種；如果所述PCR產物A1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR產物C1中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品含有或候選含有尖孢鐮刀菌古巴專化型4號生理小種，所述尖孢鐮刀菌古巴專化型4號生理小種不為尖孢鐮刀菌古巴專化型亞熱帶4號生理小種；如果所述PCR產物A1中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品不含或候選不含尖孢鐮刀菌古巴專化型4號生理小種；

J下述J1)或J2)或J3)或J4)：

J1)下述J11)和J12)：

J11)以待測生物樣品的RNA或以RNA為模板轉錄得到的cDNA為模板，用權利要求1所述B進行PCR擴增得到PCR產物B1；以所述待測生物樣品的核酸為模板，用權利要求1所述C進行PCR擴增得到PCR產物C1；

J12)檢測J11)所述PCR產物B1和所述PCR產物C1的大小，如果所述PCR產物B1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR產物C1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品含有或候選含有尖孢鐮刀菌古巴專化型亞熱帶4號生理小種；如果所述PCR產物B1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR產物C1中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品含有或候選含有尖孢鐮刀菌古巴專化型，所述尖孢鐮刀菌古巴專化型不為尖孢鐮刀菌古巴專化型亞熱帶4號生理小種；如果所述PCR產物B1中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品不含或候選不含尖孢鐮刀菌古巴專化型；

J2)下述J21)和J22)：

J21)以待測生物樣品的DNA為模板，用權利要求1所述B進行PCR擴增得到PCR產物B2；以所述待測生物樣品的核酸為模板，用權利要求1所述C進行PCR擴增得到PCR產物C2；

J22)檢測J21)所述PCR產物B2和所述PCR產物C2的大小，如果所述PCR產物B2中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR產物C2中含有500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品含有或候選含有尖孢鐮刀菌古巴專化型亞熱帶4號生理小種；如果所述PCR產物B2中含有500bp-750bp的DNA片段，所述PCR產物C2中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品含有或候選含有尖孢鐮刀菌古巴專化型，所述尖孢鐮刀菌古巴專化型不為尖孢鐮刀菌古巴專化型亞熱帶4號生理小種；如果所述PCR產物B2中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品不含或候選不含尖孢鐮刀菌古巴專化型；

J3)下述J31)和J32)：

J31)在同一個PCR反應體系中，以待測生物樣品的RNA或以RNA為模板轉錄得到的cDNA為模板，用權利要求3所述成套引物進行PCR擴增得到PCR產物；

J32)檢測J31)所述PCR產物的大小，如果所述PCR產物中含有兩條500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品含有或候選含有尖孢鐮刀菌古巴專化型亞熱帶4號生理小種；如果所述PCR產物中僅含有一條500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品含有或候選含有尖孢鐮刀菌古巴專化型，所述尖孢鐮刀菌古巴專化型不為尖孢鐮刀菌古巴專化型亞熱帶4號生理小種；如果所述PCR產物中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品不含或候選不含尖孢鐮刀菌古巴專化型；

J4)下述J41)和J42)：

J41)在同一個PCR反應體系中，以待測生物樣品的DNA為模板，用權利要求3所述成套引物進行PCR擴增得到PCR產物；

J42)檢測J41)所述PCR產物的大小，如果所述PCR產物中含有兩條500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品含有或候選含有尖孢鐮刀菌古巴專化型亞熱帶4號生理小種；如果所述PCR產物中僅含有一條500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品含有或候選含有尖孢鐮刀菌古巴專化型，所述尖孢鐮刀菌古巴專化型不為尖孢鐮刀菌古巴專化型亞熱帶4號生理小種；如果所述PCR產物中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品不含或候選不含尖孢鐮刀菌古巴專化型；

K下述K1)和K2)：

K1)以所述待測生物樣品的核酸為模板，用權利要求1所述C進行PCR擴增得到PCR產物C1；

K2)檢測K1)所述PCR產物C1的大小，如果所述PCR產物C1中含有500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品含有或候選含有尖孢鐮刀菌古巴專化型亞熱帶4號生理小種；如果所述PCR產物C1中不含500bp-750bp的DNA片段，所述待測樣品不含或候選不含尖孢鐮刀菌古巴專化型亞熱帶4號生理小種。