[發明專利]微RNA與鋰離子在制備對人結腸癌細胞凋亡協同調控生物制劑的應用

在審

• 申請號: 201510082298.X
• 申請日: 2015-02-13
• 公開（公告）號: CN104667298A
• 公開（公告）日: 2015-06-03
• 發明（設計）人: 鄒一平
• 申請（專利權）人: 宜春學院;鄒一平
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K31/7105;A61P35/00;A61K33/00
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 何為;周棟

技術領域

本發明屬于分子生物技術領域，具體涉及微RNA與鋰離子在制備對人結腸癌細胞凋亡的協同調控生物制劑的應用。

背景技術

微RNA(microRNA)是非編碼RNA家族中長度約為18-32個核苷酸的調控小RNA分子，它通過mRNA剪切和抑制蛋白質翻譯的方式負調控靶基因。迄今為止，已經在線蟲、擬南芥、果蠅、小鼠和人等200個以上物種發現了數以萬計的microRNA分子。進一步的研究表明，microRNA可以調節約50％的蛋白編碼基因，并且microRNA分子參與了包括發育、細胞分化、細胞凋亡、脂類代謝和激素分泌等在內的多種生理過程，以及包括RA在內的免疫、炎癥等多種病理過程。

miRNA(microRNA)是一類重要的非編碼RNA,通過在轉錄后水平上抑制靶基因的mRNA翻譯或降解靶基因mRNA來發揮作用。根據miRBase數據庫,到目前為止,已經發現了678個人類的microRNA基因,并且有證據表明在人類中尚有大量的microRNA有待發現，microRNA的總數可能會更多。目前認為microRNA參與很多重要的生物學過程,如轉錄因子調控網絡，發育過程中的時序控制,神經突觸形成，細胞增殖，細胞死亡,細胞分化等。

國內外大量研究發現，miRNA在腫瘤的發生發展過程中發揮了重要的調控作用。成為一類新型的癌基因或抑癌基因。腫瘤細胞的增殖、分化、凋亡、轉移、耐藥、復發等多種生物學過程都與miRNA密不可分。雖然miRNA的序列很小，但是一個miRNA往往可以調控多個基因，形成序列放大的基因調控通路；也可以受很多基因的調控，從而在生物體內構成了一個龐大的復雜的基因調控網絡。大量研究證明，miRNA參與了干細胞和腫瘤干細胞自我更新和多向分化潛能性的調節。例如MiR-21、miR-134、miR-470通過靶向自我更新相關基因nanog、SOX2、OCT4調節胚胎干細胞的自我更新及分化。最早在小桿線蟲體內發現的微RNA調控基因Let-7證實能夠調控乳腺癌干細胞的自我更新和增殖及細胞凋亡等的進程。

發明內容

本發明旨在克服現有技術的不足，提供微RNA與鋰離子在制備對人結腸癌細胞凋亡協同調控生物制劑的應用。

結腸癌癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，目前篩選與人體具有高度同源microRNA調控人體癌細胞凋亡作用的研究尚淺。本發明的發明人以具有抗腫瘤活性的江西道地中藥材篩選鑒定到一系列microRNA，從這些中藥材分離鑒定具有抗腫瘤活性的microRNA，并對其中的microRNA進行家族分類，從中篩選可能對結腸癌細胞凋亡起調控作用的microRNA，驗證微RNA在抗癌作用方面的可行性，研制對結腸癌細胞凋亡起調控作用的活性微RNA生物藥。

發明人通過提取多種江西道地抗腫瘤活性的中藥材體內的微RNA，進行結腸癌細胞凋亡調控作用活性實驗。對提取的微RNA測序，檢測鑒定到3600余種微RNA，從中篩選2個微RNA對結腸癌細胞轉染，發現對結腸癌細胞的凋亡具有調控效應。用微RNA?ggo-miR-192和hme-miR-34轉染結腸癌細胞處理，經過對結腸癌細胞凋亡的流式細胞檢測和DAPI及TUNEL標記檢測，發現在加入特定濃度和劑量碳酸鋰或氯化鋰處理，兩種微RNA與鋰離子對結腸癌細胞凋亡的調控作用效果明顯增強，兩者表現對結腸癌細胞凋亡具有顯著的協同正調控作用。ggo-miR-192序列如SEQ?ID?NO.1所示，hme-miR-34序列如SEQ?ID?NO.2所示。所述微RNA與鋰離子的比例為：2：70—80，優選為：2：75。

附圖說明

圖1為HCT116細胞培養形態照片，10x10拍照；

圖2為NC處理HCT116細胞形態照片，10x10拍照；

圖3為ggo-mir-192處理HCT116細胞形態照片，10x10拍照；

圖4為hme-miR-34處理HCT116細胞形態照片，10x10拍照；

圖5為ggo-miR-192?I處理HCT116細胞形態照片，10x10拍照；

圖6為7.5mM?Licl+NC處理HCT116細胞形態照片，10x10拍照；

圖7為7.5mM?Licl+ggo-mir-192處理HCT116細胞形態照片，10x10拍照；

圖8為0.75mM?Li2CO3+ggo-mir-192處理HCT116細胞形態照片，10x10拍照；