[發明專利]一種提高生物絮凝劑活性成分多糖產量的發酵方法

有效

• 申請號: 201510081830.6
• 申請日: 2015-02-15
• 公開（公告）號: CN104673856B
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發明（設計）人: 李昂;吳丹;楊基先;皮姍姍;魏薇;郭海娟;龐長瀧;馬放
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;C12R1/01
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所23109
• 代理人: 侯靜

1.一種提高生物絮凝劑活性成分多糖產量的發酵方法，其特征在于它是按照以下步驟操作的：首先將生物絮凝劑產生菌接種至絮凝發酵液體培養基中，發酵制備種子液；然后將種子液接種于投加了外源AHLs的絮凝發酵液體培養基中，進行二次發酵，即制得生物絮凝劑，完成所述的提高生物絮凝劑活性成分多糖產量的發酵；其中，外源AHLs為N-3-氧-辛酰高絲氨酸內酯、N-己酰高絲氨酸內酯中的一種或兩種按任意比混合；其中，投加了外源AHLs的絮凝發酵液體培養基為將外源AHLs加入到絮凝發酵液體培養基中至外源AHLs的終濃度為0.1μM～0.5μM；生物絮凝劑產生菌為革蘭氏陰性細菌，即根瘤土壤桿菌(Agrobacterium tumefaciems)F2，保存于中國微生物菌種保藏中心，保藏地址是北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏日期為2014年12月03日，保藏編號為CGMCC No.10131；

外源AHLs為將N-3-氧-辛酰高絲氨酸內酯和N-己酰高絲氨酸內酯分別溶于溶劑二甲基亞砜形成的溶液或二者混合后的溶液。

2.根據權利要求1所述的一種提高生物絮凝劑活性成分多糖產量的發酵方法，其特征在于外源AHLs的N-3-氧-辛酰高絲氨酸內酯溶液和N-己酰高絲氨酸內酯溶液的濃度均為0.1μM～0.5μM。

3.根據權利要求1所述的一種提高生物絮凝劑活性成分多糖產量的發酵方法，其特征在于絮凝發酵液體培養基配制如下：1L蒸餾水中加入10g的葡萄糖、5g的K₂HPO₄、2g的KH₂PO₄、0.1g的MgSO₄·7H₂O、0.1g的NaCl、0.5g的尿素和0.5g的酵母膏；pH為7.2～7.5，112℃滅菌30min，即完成絮凝發酵液體培養基的配制。

4.根據權利要求1所述的一種提高生物絮凝劑活性成分多糖產量的發酵方法，其特征在于生物絮凝劑產生菌接種前需進行活化培養。

5.根據權利要求4所述的一種提高生物絮凝劑活性成分多糖產量的發酵方法，其特征在于活化培養操作如下：將生物絮凝劑產生菌轉接到普通固體培養基的平皿中活化，于30℃培養1～2天；反復活化2～3代后，即完成活化培養。

6.根據權利要求1所述的一種提高生物絮凝劑活性成分多糖產量的發酵方法，其特征在于發酵制備種子液的條件為：發酵溫度為30～32℃，轉速為140～150r/min，發酵時間為24～26h。

7.根據權利要求1所述的一種提高生物絮凝劑活性成分多糖產量的發酵方法，其特征在于二次發酵的條件為：發酵溫度為30～32℃，轉速為140～150r/min，發酵時間為24～26h。