[發明專利]基于量子點間接免疫熒光的病原體檢測方法

在審

• 申請號: 201510081033.8
• 申請日: 2015-02-13
• 公開（公告）號: CN104634969A
• 公開（公告）日: 2015-05-20
• 發明（設計）人: 張二盈
• 申請（專利權）人: 深圳市金準生物醫學工程有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/542
• 代理公司: 深圳市精英專利事務所 44242
• 代理人: 馮筠

技術領域

本發明涉及生物細菌標記技術領域，尤其涉及一種基于量子點間接熒光免疫細菌標記方法。

背景技術

由于工業的發展，環境污染越來也嚴重，空氣中充滿各種病原體，細菌，這些病原體細菌一旦被人呼吸或者其他方式感染很容易引發多種疾病，例如，在人體的呼吸道中經常會感染諸如病毒，細菌，支原體，衣原體，軍團菌等微生物病菌，而引發支氣管炎，慢性支氣管炎，肺炎，支氣管擴張等疾病。但是目前為了標記具體病菌的類別主要采用免疫蛋白標記方法，進行病菌的識別標記，但是這種標記識別方式穩定性差，存在壽命短，標記效率低。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基于量子點間接免疫熒光的病原體檢測方法，其解決了目前病菌檢測標記中穩定性差，標記效率低的技術問題。

為達到上述目的，本發明所提出的技術方案為：

本發明的一種基于量子點間接免疫熒光的病原體檢測方法，其包括如下步驟：

第一步，對病原體進行包被，并進行增殖培養；

第二步，設置質控孔，將無吸附病毒的MDCK細胞包被在玻片陰極質控孔中，做陰極對照，將吸附有病毒的MDCK細胞包被在玻片陽極質控孔中，做陽極對照；

第三步，用化學交聯法將量子點與抗人IgM的特異性抗體連接，得到量子點修飾抗體；

第四步，利用計算機對掃描圖片進行鏡檢和分析。

其中，所述的第一步中病原體增殖培養，培養至病原體細胞長至80％單層。

其中，所述的玻片上設有凹槽，所述凹槽底部設有縱橫分布的條紋。

其中，所述的病原體包被包括以下步驟：

第一步，用體積比5％的磷壁酸溶液處理玻片；

第二步，將病原體細胞懸浮液用超聲波震蕩10至20秒，然后將細胞懸浮液滴加在玻片孔中；

第三步，將細胞懸浮液用紫外線照射10至15分鐘，然后用冷丙酮固定10分鐘；

第四步，用體積比為50％的甘油溶液浸潤5分鐘；

第五步，吹干后冷凍保存待用。

其中，所述的量子點包括單一化合物的量子點和核殼型量子點。

其中，所述的化學交聯法為EDC/NHS交聯法。

與現有技術相比，本發明的一種基于量子點間接免疫熒光標記方法，其靈敏度高、自動化強、細胞固定穩固等優點。

附圖說明

圖1為本發明一種基于量子點間接免疫熒光的病原體檢測方法的流程圖；

圖2為本發明一種基于量子點間接免疫熒光的病原體檢測方法的包被方法流程圖。

具體實施方式

以下參考附圖，對本發明予以進一步地詳盡闡述。

請參閱圖1和附圖2，本發明的一種基于量子點間接免疫熒光的病原體檢測方法，其包括如下步驟：

第一步S1，對病原體進行包被，并進行增殖培養；

第二步S2，設置質控孔，將無吸附病毒的MDCK細胞包被在玻片陰極質控孔中，做陰極對照，將吸附有病毒的MDCK細胞包被在玻片陽極質控孔中，做陽極對照；

第三步S3，用化學交聯法將量子點與抗人IgM的特異性抗體連接，得到量子點修飾抗體；

第四步S4，利用計算機對掃描圖片進行鏡檢和分析。

其中，所述的第一步中病原體增殖培養，培養至病原體細胞長至80％單層。

其中，所述的玻片上設有凹槽，所述凹槽底部設有縱橫分布的條紋。

其中，請參閱附圖2，所述的病原體包被包括以下步驟：

第一步T1，用體積比5％的磷壁酸溶液處理玻片；

第二步T2，將病原體細胞懸浮液用超聲波震蕩10至20秒，然后將細胞懸浮液滴加在玻片孔中；

第三步T3，將細胞懸浮液用紫外線照射10至15分鐘，然后用冷丙酮固定10分鐘；

第四步T4，將體積比為50％的甘油溶液浸潤5分鐘；

第五步T5，吹干后冷凍保存待用。

更具體的，所述步驟一S1：對病原體進行包被，首先進行病原體的增殖培養。例：人流感病毒選用MDCK細胞，呼吸道合胞病毒選用HEP-2細胞等，對人流感病毒、呼吸道合胞病毒等病原體進行增殖。首先進行細胞株培養，待細胞長至80％單層，吸附病毒液，增殖病毒。待細胞出現病變，將病變細胞固定到玻片上。

以人流感病毒為例：從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化。