[發(fā)明專利]一種用于骨質疏松的診斷的血液檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510080695.3
• 申請日: 2015-02-13
• 公開（公告）號: CN104694639B
• 公開（公告）日: 2017-11-14
• 發(fā)明（設計）人: 李英賢;凌樹寬;李琦
• 申請（專利權）人: 中國航天員科研訓練中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京市嘉元知識產(chǎn)權代理事務所(特殊普通合伙)11484
• 代理人: 劉彬

本申請要求中國發(fā)明專利申請201410050513.3的優(yōu)先權(申請日：2014年02月14日，發(fā)明名稱：一種用于骨質疏松的輔助診斷的血液檢測試劑盒)。

技術領域

本發(fā)明屬于分子診斷領域，尤其涉及可用于骨質疏松的診斷的血液檢測試劑盒。此外，本發(fā)明還涉及用于擴增miR-214的引物在制備可用于骨質疏松的診斷的血液檢測試劑盒中的用途。

背景技術

骨質疏松癥是指以單位體積內骨量低于正常為特征的骨胳疾病，骨質有機成分生成不足、繼發(fā)性鈣鹽減少及骨組織微隙結構破壞是其主要表現(xiàn)。骨質疏松癥目前已經(jīng)成為世界性問題，是繼腫瘤、心血管疾病之后又一嚴重危害人類健康的一種疾病。有研究顯示，骨質疏松癥其發(fā)病率居常見病、多發(fā)病的第7位。

骨質疏松發(fā)病現(xiàn)狀

我國是世界上老年人口數(shù)量最多的國家，預測到2050年我國60歲以上的老年人將占全國總人口的20％。隨著人口的日益老齡化，老年性疾病，特別是骨質疏松的發(fā)病率也在同步增長。目前我國有骨質疏松病人約9000萬。到2050年將增至2億多人，占人口的13.2％，但目前醫(yī)學上還未有安全而有效的根治方法幫助已疏松的骨胳恢復原狀。因此，正確認識、早期預防、早期干預、早期診斷顯得尤為重要。

骨質疏松的現(xiàn)行診斷方法

骨質疏松癥是一種發(fā)病隱匿、常見但又診斷不足的疾病，其早期準確診治將有助于為更好的防治骨質疏松提供依據(jù)。目前骨質疏松的診斷仍沿用1994年WHO頒布的以骨礦含量(BMC)和骨密度(BMD)為基礎的骨質疏松診斷標準，即以雙能X線吸收法(DEXA)為基本測量方法。BMC或BMD在青年成人平均值的1個標準差(s)以內者為正常；若以T評分(T值)表示，即≥-1.0為正常，-2.5<T值<-1.0為骨量減少，≤-2.5為骨質疏松。但目前集中于-2.5的T評分閾值正在發(fā)生改變。利用該標準進行判斷時，骨質疏松組和正常組有一定程度上的重疊，該標準有待進一步完善。除此之外，臨床上還結合血、尿生化檢測、內分泌功能測定、骨形成和骨吸收指標、骨骼X射線、雙能X線骨密度吸收法(DEXA)及定量CT(QCT)以及定量超聲(QUS)等檢測指標，上述檢查指標花費高，步驟繁瑣，結果不準確，等診斷為骨質疏松時，病人已經(jīng)發(fā)生了骨量和結構的改變，加之目前又缺乏真正有效的治療藥物，因而亟需發(fā)現(xiàn)更加靈敏、特異、易于檢測、明確而有效的生物標志物，對骨質疏松作出準確、及時的診斷。

另一方面，近來，人們越來越認識到miRNA是在發(fā)育、病理與生理條件下發(fā)揮重要作用的調控因子，參與腫瘤的發(fā)生、病毒的感染、細胞的分化與功能的發(fā)揮等一系列的生命過程中。miRNA是單鏈的小RNA分子，大約21或22個核苷酸長。這些小RNA分子不編碼蛋白，但是它們通過降低mRNA的水平或與mRNA 3’UTR相結合抑制翻譯，從而降低體內的蛋白水平。令人意想不到的是非編碼RNA分子占人類基因組總量的98％，非編碼RNA與蛋白編碼RNA的比例與發(fā)育的復雜性密切相關。因此，如果篩選出在骨質疏松發(fā)生過程中血液中異常表達的miRNA作為生物標志物，并研制相應的診斷試劑盒，對骨質疏松的診斷現(xiàn)狀必將是一次有力的推動。

關于miR-214

miR-214最早發(fā)現(xiàn)在斑馬魚的慢肌發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用。后來證實，miR-214可以與Ezh2的3’UTR相結合，降低細胞內Ezh2的水平，從而促進骨骼肌細胞的分化和胚胎干細胞中發(fā)育調控因子的轉錄。在未分化的骨胳肌細胞中，PcG蛋白抑制miR-214的轉錄，隨著發(fā)育的進行，伴隨著PcG的解離和MyoD以及myogenin的募集，從而激活miR-214的轉錄。

已有研究表明，骨質疏松病人骨組織中的miR-214的表達水平明顯升高，因此，骨組織中的miR-214可作為骨質疏松早期診斷及預防的生物標志物(中國專利申請公開號CN102335189A)。

但是，骨組織中的miR-214來源于成骨細胞，而成骨細胞成分不能進入到血液中，因此，骨組織中的miR-214與血液中的miR-214并無關聯(lián)。

發(fā)明內容

本發(fā)明人長期從事miRNA相關的研究工作，在深入的研究中，我們通過大量的實驗發(fā)現(xiàn)：

血液中的miR-214(5’-ACAGCAGGCACAGACAGGCAGU-3’)是骨質疏松發(fā)病的特異性生物標志物，從而完成了本發(fā)明。

即，本發(fā)明包括：

1.一種血液檢測試劑盒，其包括：

用于擴增miR-214的引物，以及

用于從血液中提取miRNA的試劑；