[發明專利]CYP2C19*2基因型快速檢測試劑盒及其方法

在審

• 申請號: 201510079647.2
• 申請日: 2015-02-13
• 公開（公告）號: CN104711345A
• 公開（公告）日: 2015-06-17
• 發明（設計）人: 任曉東;羅志超
• 申請（專利權）人: 重慶京因生物科技有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 重慶強大凱創專利代理事務所(普通合伙) 50217
• 代理人: 黃書凱

1.CYP2C19*2基因型快速檢測試劑盒，其特征在于：包括PCR反應混合液，PCR反應混合液原料包括DNA聚合酶、dNTPs、CYP2C19*2上游引物、CYP2C19*2下游引物、CYP2C19*2突變型分子信標、CYP2C19*2野生型分子信標、MgCl₂、PCR緩沖液和細胞裂解液。

2.如權利要求1所述的CYP2C19*2基因型快速檢測試劑盒，其特征在于：所述的細胞裂解液的原料由十二烷基硫酸鈉、聚乙二醇辛基苯基醚組成。

3.如權利要求2所述的CYP2C19*2基因型快速檢測試劑盒，其特征在于：所述的PCR緩沖液為5x?Colorless?Reaction?Buffer。

4.如權利要求3所述的CYP2C19*2基因型快速檢測試劑盒，其特征在于：PCR反應混合液原料的終濃度為：

DNA聚合酶?0.04-0.1U/ul????????dNTPs??0.1-0.5mM

CYP2C19*2上游引物???0.2-0.5?uM

CYP2C19*2下游引物???0.2-0.5?uM

CYP2C19*2突變型分子信標??0.2-0.5uM

CYP2C19*2野生型分子信標??0.2-0.5?uM

5x?Colorless?Reaction?Buffer???0.5-1.5x

MgCl₂????1-2.5?mM

細胞裂解液的原料終濃度為：

十二烷基硫酸鈉??0.0005-0.015%w/v

聚乙二醇辛基苯基醚??0.001-0.03%w/v。

5.如權利要求4所述的CYP2C19*2基因型快速檢測試劑盒，其特征在于：PCR反應混合液原料的終濃度為：

DNA聚合酶?0.08U/ul????????dNTPs??0.3mM

CYP2C19*2上游引物???0.4?uM

CYP2C19*2下游引物???0.4?uM

CYP2C19*2突變型分子信標??0.4?uM

CYP2C19*2野生型分子信標??0.3?uM

5x?Colorless?Reaction?Buffer???1x

MgCl_2????2?mM

細胞裂解液的原料終濃度為：

十二烷基硫酸鈉??0.005%w/v

聚乙二醇辛基苯基醚??0.01%w/v。

6.如權利要求1-5中任意一個所述的CYP2C19*2基因型快速檢測試劑盒，其特征在于：

所述的CYP2C19*2上游引物、CYP2C19*2下游引物的序列分別為：

上游引物5’-3’：TGCAATAATTTTCCCACTATCATTG；

下游引物5’-3’：CCAAAATATCACTTTCCATAAAAGCA。

7.如權利要求6所述的CYP2C19*2基因型快速檢測試劑盒，其特征在于：所述的CYP2C19*2突變型分子信標和CYP2C19*2野生型分子信標的序列分別為：

突變型分子信標5’-3’：

CGGACCTTTCCCGGGAACCCATAACGGTCCG；

野生型分子信標5’-3’：

CGGACCTCCCAGGAACCCATAACAAATGGTCCG。

8.如權利要求7所述的CYP2C19*2基因型快速檢測試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒的分裝量為10-50ul。

9.CYP2C19*2基因型快速檢測方法，其特征在于：檢測步驟包括：

取樣：

A：患者先用溫水漱口2-3次，去除口腔內的食物殘渣；

B：打開裝有檢測試劑的試劑盒，取出試劑管；

C：用牙簽伸入患者口腔內頰處前、后或者上、下刮取3-4次，取得樣品；

D：將取過樣品的牙簽帶有樣品的一端插入試劑管中；

待試劑凍融之后，彈試劑管，細胞樣品在試劑中混合均勻；

去除氣泡；

反應

將樣品處理后的試劑管放入定量PCR儀器進行反應；

三、分析結果

得到擴增曲線和熒光顏色分析結果。

10.如權利要求9所述的CYP2C19*2基因型快速檢測方法，其特征在于：所述第二步的反應步驟中反應步驟為：

a、95℃預變性5min；

b、95℃變性5s；

c、56℃退火30s；

且a、b、c步驟反應50個循環；

在反應過程中的光學條件為：熒光PCR至少為雙通道，且雙通道的激發光波長分別為450-500nm和550-600nm之間。