[發明專利]用于治療肝纖維化的結締組織生長因子嵌合疫苗及其應用

有效

• 申請號: 201510075963.2
• 申請日: 2015-02-12
• 公開（公告）號: CN104740628B
• 公開（公告）日: 2017-09-26
• 發明（設計）人: 郝志明;李爽;呂頤菲;張倩楠;蘇厚強;霍涌瑋;田宏;王麗蓉
• 申請（專利權）人: 西安交通大學醫學院第一附屬醫院
• 主分類號: A61K39/29
• 分類號: A61K39/29;A61P1/16;A61K39/00
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司61200
• 代理人: 徐文權

技術領域

本發明屬于肝纖維化治療藥物領域，具體涉及一種用于治療肝纖維化的結締組織生長因子嵌合疫苗及其應用。

背景技術

肝纖維化(liver fibrosis)是肝臟對各種原因所致肝損傷的創傷愈合反應，表現為肝內結締組織增生與沉積。肝纖維化是多種慢性肝病向肝硬化發展必經的病理過程，是決定慢性肝病預后的最主要因素之一。目前，大部分慢性肝病都缺乏有效的病因治療，而且研究證實部分肝病在病因去除后肝纖維化仍可繼續進展，故阻滯或延緩肝纖維化的發生發展，從而防止其進展為肝硬化成為慢性肝病治療的主要途徑之一。但目前尚無真正意義上安全、有效的抗肝纖維化藥物或措施，探索安全有效的抗肝纖維化措施是目前肝病學研究領域面臨的重要課題。

結締組織生長因子(connective tissue growth factor,CTGF)，是新近發現的一種強力的促進肝纖維化因子，在肝纖維化發生發展過程中起著中心作用。CTGF是分泌型蛋白，是高度保守的CCN家族成員之一，具有促進細胞增殖，促進細胞外基質沉積，介導細胞粘附，刺激細胞遷移，促進軟骨形成及骨骼發育等多種生物學作用。CTGF在肝纖維化肝組織中表達上調，其表達水平與肝纖維化程度正相關。

乙肝病毒核心抗原(heptitis B core，HBc)是乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV)的重要結構蛋白，免疫原性強，是機體CTL識別的主要靶抗原之一。HBc融合異源表位后在原核和真核細胞內均能高效表達，并且可以裝配成球形病毒樣顆粒(virus-like particle，VLP)。HBc顆粒的TI Ag特性是其再無佐劑時也能誘導Th1應答，且可通過B細胞提呈進而啟動T細胞應答，提高HBc免疫原性。融合外源序列的嵌合HBc顆粒可以引起強烈的免疫應答反應，明顯提高插入序列的免疫原性。HBc的N端、C端及MIR(major immunodominant region)區均可供外源短肽插入，并維持正確的構象，增強其免疫原性，但MIR區的免疫原性更強。HBc顆粒載體由于其強力的免疫原性在疫苗研究中具有重要價值。

將自體蛋白的抗原表位插入乙肝病毒核心抗原的MIR表位制備成的嵌合疫苗是一種新型疫苗。這種新型疫苗借助HBc顆粒載體打破機體對自體蛋白質的免疫耐受，使機體發生針對自體蛋白特定的抗原表位的免疫應答。刺激機體產生的抗體可以有效地結合靶蛋白，并且中和該靶蛋白的生物學活性。這些特點使得嵌合疫苗在疾病治療中極具應用價值。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于治療肝纖維化的結締組織生長因子嵌合疫苗及其應用。

本發明是通過以下技術方案來實現：

一種嵌合疫苗，該嵌合疫苗是將結締組織生長因子的抗原表位插入乙肝核心抗原的c/e1B細胞表位中裝配而成；所述結締組織生長因子的抗原表位的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。

所述c/e1B細胞表位為乙肝核心抗原的第79至第81位氨基酸。

結締組織生長因子的抗原表位插入乙肝核心抗原的c/e1B細胞表位中，裝配成乙肝核心病毒樣顆粒的嵌合疫苗。

所述乙肝核心病毒樣顆粒是由180或240個乙肝核心抗原組成的亞單位構成。

所述的乙肝核心抗原是含有第1至第149位氨基酸的截短型分子。

本發明的嵌合疫苗在制備抗肝纖維化的藥物中的應用。

所述的藥物為抑制肝臟肝星狀細胞激活程度的藥物。

所述的藥物為刺激肝細胞增殖的藥物。

所述的藥物為抑制肝細胞凋亡的藥物。

所述的藥物為降低肝組織中TGF-β1、PDGF及TIMP-1蛋白質表達水平的藥物。

與現有技術相比，本發明具有以下有益的技術效果：

本發明公開了一種用于治療肝纖維化的CTGF嵌合疫苗，通過將CTGF的抗原表位插入乙肝核心抗原的c/e1B細胞表位，構建可以裝配成乙肝核心樣顆粒的CTGF嵌合疫苗。該嵌合疫苗在無佐劑的輔助下，仍然可以刺激機體產生高效價的抗CTGF中和性抗體。用該嵌合疫苗免疫后的小鼠，經四氯化碳誘導后產生的肝纖維化程度明顯減輕。