[發明專利]PLEKHA5在制備腫瘤診斷試劑中的應用

有效

• 申請號: 201510075919.1
• 申請日: 2015-02-13
• 公開（公告）號: CN104740649B
• 公開（公告）日: 2018-03-16
• 發明（設計）人: 楊承剛;邊洋;孫耀蘭;任靜
• 申請（專利權）人: 北京泱深生物信息技術有限公司
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K31/7088;C12Q1/6886;A61P35/00
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技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，PLEKHA5在制備腫瘤診斷試劑中的應用，具體的本發明涉及PLEKHA5在制備骨肉瘤診斷試劑中的新用途。

背景技術

PLEKHA5是PLEKHA((pleckstrin homology domain-containing protein family A)家族的一員，目前關于該基因的研究非常少。Kenichiro等(Identification and characterization of splicing variants of PLEKHA5(Plekha5)during brain development，Gene，Volume 492，Issue 1，15January 2012，270-275)對該基因進行研究后發現，其mRNA有兩種表達形式，較長的mRNA鏈(L-PLEKHA5)有32個外顯子，編碼1282個氨基酸，在腦組織中表達較高，而較短的(S-PLEKHA5)有26個外顯子，編碼1116個氨基酸，在機體的各個部位都有表達。這兩種形式的mRNA編碼的蛋白質均具有WW及PH結構域，主要位于細胞質中。在小鼠E13.5時PLEKHA5表達量最多，其中S-PLEKHA5占主要部分，隨后開始出現PLEKHA5總量下降，但是L-PLEKHA5的表達量卻逐漸增加，直到E17.5時，L-PLEKHA5的表達量達到最大，并一直維持在小鼠的整個成年期，提示PLEKHA5的表達量可能與小鼠的年齡呈依賴性關系。實驗還發現在這個轉變過程中PLEKHA5的PH結構域可以特異性的與PI3P，PI4P，PISP及PI(3，5)P2結合。這些均提示PLEKHA5可能通過與特異的磷酸肌醇連接完成從短鏈到長鏈轉變，這在大腦發育的過程中起著重要的作用。

骨肉瘤(Oseteosarcoma)是除漿細胞瘤外最常見的惡性骨原發性腫瘤，其組織學特點是在多數情況下腫瘤細胞產生骨樣或不成熟骨。骨肉瘤易于侵及生長迅速的干髓端，其典型的位置是在長管狀骨，股骨遠端及脛骨、朧骨的近端是最常見的發病部位，全部病人的50％-70％病變發生在膝關節周圍。骨肉瘤起病時無明顯的臨床癥狀，極易與外傷混淆，且惡性程度高早期即可能發生肺轉移，故其危害性大死亡率很高。臨床骨科工作者一直致力于對其防治的研究，希望尋找到骨肉瘤精確有效治療的靶點。

發明人對5例骨肉瘤病例樣本及3例正常對照進行高通量測序，結合生物信息學方法進行基因篩選，挑選出候選基因PLEKHA5。近來還有研究發現，在先天性攣縮綜合癥及神經肌肉疾病中，磷酸肌醇與PI(3、5)P2代謝異常被認為是導致該疾病的可能原因。PLEKHA5蛋白可能通過內吞作用與細胞膜上的PI(3，5)P2連接，從而激活細胞膜上的信號通路導致代謝異常。但是并沒有研究表明PLEKHA5與骨肉瘤之間的關系，進一步，本發明進行了分子細胞生物學方法證實了PLEKHA5與骨肉瘤的關系：PLEKHA5與骨肉瘤具有很好的相關性，骨肉瘤細胞的增殖及侵襲中具有重要的作用，可用于制備骨肉瘤輔助診療制劑，具有重要的臨床應用價值。

發明內容

本發明的目的在于提供PLEKHA5基因和/或蛋白抑制劑在制備抗骨肉瘤制劑中的應用。

為實現上述目的，本發明首先通過高通量測序結合生物信息學方法篩選到候選基因PLEKHA5，今兒通過分子細胞生物學方法驗證了PLEKHA5與骨肉瘤的關系：PLEKHA5與骨肉瘤具有很好的相關性，PLEKHA5在骨肉瘤細胞的增殖及侵襲中具有重要的作用，可用于制備骨肉瘤輔助診療制劑，具有重要的臨床應用價值。

進一步，所述抗骨肉瘤制劑是指可以抑制骨肉瘤細胞中PLEKHA5基因的表達的制劑。本領域人員熟知抑制基因的表達通常可以采用下述方法中的一種和/或幾種：通過激活目的基因的抑制基因、激活目的基因的抑制基因表達的蛋白、采用RNA干擾技術抑制目的基因表達、激活促進目的基因mRNA降解的microRNA、導入促進目的基因編碼蛋白降解的分子、抑制促進目的基因表達的因子及蛋白的表達。即通過激活PLEKHA5基因的抑制基因、激活抑制PLEKHA5基因表達的蛋白、導入抑制PLEKHA5基因表達的siRNA、激活促進PLEKHA5mRNA降解的microRNA、導入促進PLEKHA5蛋白降解的分子、抑制促進PLEKHA5基因表達的因子及蛋白的表達。