[發明專利]一種檢測微囊藻毒素的方法

在審

• 申請號: 201510075110.9
• 申請日: 2015-02-12
• 公開（公告）號: CN104849361A
• 公開（公告）日: 2015-08-19
• 發明（設計）人: 房艷;陳彥杰;沈曉彥;白雪梅;王躍
• 申請（專利權）人: 新奧科技發展有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/34
• 代理公司: 北京中博世達專利商標代理有限公司 11274
• 代理人: 申健

技術領域

本發明涉及分析檢測技術領域，尤其涉及一種檢測微囊藻毒素的 方法。

背景技術

近年來，藻類作為人類保健食品添加劑已得到了大力發展，與其 相關的食品安全問題也因此提上日程。但藻類中可能含有一種次生代 謝產物--微囊藻毒素，該微囊藻毒素為七肽單環肝毒素，能夠強烈抑制 蛋白磷酸酶的活性，是強烈的肝臟腫瘤促進劑，其對水體環境和人群 健康的危害已成為全球關注的重大環境問題之一。因此，準確檢測藻 類中微囊藻毒素的含量顯得尤為重要。

目前，現有技術中常用的液相色譜檢測法，通常選用腈、水和有 機酸的混合液作為流動相進行檢測，但該流動相容易因外界環境的干 擾或因有機相的揮發而導致自身pH改變，因此現有技術的流動相提供 的檢測環境穩定性較差，而且，微囊藻毒素通常以痕量形式存在，更 易于受到檢測環境的影響，導致檢測結果不準確，此外，流動相中腈 的毒性較大，對人體及環境危害相對較大。

發明內容

本發明實施例提供了一種檢測微囊藻毒素的方法，檢測結果準確， 且環境友好。

為達到上述目的，本發明提供一種檢測微囊藻毒素的方法，所述 方法包括：

對樣品中的微囊藻毒素進行提??；

對提取后所得的微囊藻毒素進行預處理；

以醇和有機酸鹽緩沖液的混合液為流動相對所述預處理后的微囊 藻毒素進行液相色譜檢測。

其中，所述醇包括甲醇、乙醇、異丙醇中的任意一種或幾種；所 述有機酸鹽緩沖液包括甲酸鹽水溶液、醋酸鹽水溶液或磷酸鹽水溶液 中的任意一種。

優選地，所述醇為甲醇，所述有機酸鹽緩沖液為磷酸鹽水溶液。

具體地，所述甲醇與所述磷酸鹽水溶液的體積比為50:50～60:40； 所述流動相的pH為2.5～3.5。

優選地，所述流動相中，所述甲醇與所述磷酸鹽水溶液的體積比 為57:43；所述流動相的pH為3。

優選地，以醇和有機酸鹽緩沖液的混合液為流動相對所述預處理 后的微囊藻毒素進行液相色譜檢測時，可檢測到的微囊藻毒素的濃度 為0.01～10μg/L。

其中，所述對樣品中的微囊藻毒素進行提取包括：

a、將樣品溶于有機酸溶液；

b、超聲振蕩提取，得到微囊藻毒素。

優選地，所述有機酸溶液的濃度為3％～10％，所述有機酸溶液與 樣品的比例為30mL/g～70mL/g。

進一步地，所述對提取后所得的微囊藻毒素進行預處理具體包括： 對提取后所得的微囊藻毒素進行萃取富集。

具體地，所述對提取后所得的微囊藻毒素進行萃取富集包括：

A、對提取后所得的微囊藻毒素進行萃??；

B、對萃取過程中吸附的微囊藻毒素進行洗脫，其中，所述洗脫為 先用水進行洗脫，再用醇溶液進行梯度洗脫。

優選地，所述用醇溶液進行梯度洗脫時，所述醇溶液的濃度范圍 為20％～100％，所述梯度洗脫達到回收率不低于90％。

優選地，所述用醇溶液進行梯度洗脫時，以等體積的醇溶液進行 梯度洗脫。

本發明實施例提供了一種檢測微囊藻毒素的方法，應用液相色譜 法對微囊藻毒素進行檢測分析，在分析過程中使用醇和有機酸鹽緩沖 液的混合液作為流動相，相比現有技術中以腈、水和有機酸的混合液 為流動相，一方面，該流動相不會因外界環境的干擾或因有機相的揮 發而導致自身pH改變，且有機酸鹽緩沖液抑制了溶質的質子化，為檢 測微囊藻毒素提供穩定的pH環境，有效避免檢測環境對微囊藻毒素的 檢測結果的影響，提高了檢測結果的準確性，另一方面，醇對微囊藻 毒素具有很好的溶解性且環境友好。

附圖說明

圖1為本發明實施例提供的一種檢測微囊藻毒素的方法的流程示 意圖；

圖2為本發明實施例提供的微囊藻毒素-RR(MC-RR)標準品的色 譜圖；

圖3為本發明實施例提供的微囊藻毒素-LR(MC-LR)標準品的色 譜圖；

圖4為本發明實施例提供的來自藻粉中的微囊藻毒素樣品的色譜 圖。

具體實施方式