[發明專利]一種利用內源酶制備藍蛤蛋白源ACE抑制肽的方法

有效

• 申請號: 201510074989.5
• 申請日: 2015-02-09
• 公開（公告）號: CN104593466B
• 公開（公告）日: 2018-02-02
• 發明（設計）人: 于志鵬;趙文竹;密更;勵建榮
• 申請（專利權）人: 渤海大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于水產品精深加工和生物技術領域，具體涉及一種利用內源酶制備藍蛤蛋白源ACE抑制肽的方法。

背景技術

藍蛤(Aloididae aloidis)是盛產于我國沿海的一種重要低值海洋貝類，肉質鮮美，殼薄肉豐滿，但由于藍蛤個體較小，食用價值不大等原因，造成豐富的藍蛤資源未得到充分利用，多被作為對蝦活餌料。藍蛤中富含多種蛋白質，且蛋白質含量高達60％，氨基酸組成全面，其氨基酸總量和必需氨基酸總量均與貽貝相當，并且精氨酸的含量較高，根據其特性可以多角度實現藍蛤蛋白資源的利用。

活性肽具有多種生物活性，并且易于機體吸收，同時兼具化學合成和化學修飾的便利性，吸引了越來越多的食品科學、生物學、化學及其交叉領域研究人員的研究興趣。隨著活性肽研宄的快速發展，伴隨已有陸地蛋白資源的有限性，利用海洋低值蛋白資源開發生物活性肽將成為研究的熱點。中國國家統計局(http：//www.stats.gov.cn/tjsj/)發布的數據表明2013年我國貝類海水產品產量已達1327.56萬噸，高于魚類海水產品產量(1119.32萬噸)，占我國海水產品產量(3138.83萬噸)的42％，居世界第一位。長期以來，我國貝類主要以鮮銷為主，銷售半徑小，且由于難于保活、保鮮，容易死亡、變質，造成很大經濟損失。利用低值貝類蛋白資源開展活性肽的研究，實現貝類精深加工和高值化利用，不僅解決了制約貝類產業鏈延伸與升級所涉及的基礎研宄中存在的重要瓶頸問題，而且也開辟了新的優質蛋白資源。藍蛤等低值貝類蛋白資源活性肽的研究逐漸受到重視。生物活性肽可細分為感官肽和生理活性肽，感官肽主要包括鮮味肽等，趙謀明等人系統深入的開展了藍蛤蛋白源鮮味肽的制備、純化等方面的基礎和應用研究。目前，對于藍蛤蛋白源生理活性肽的研究較少，未見相關報道。

發明內容

本發明為了解決現有技術的不足，提供了一種利用內源酶制備藍蛤蛋白源ACE抑制肽的方法，以解決目前藍蛤蛋白加工利用低造成優質蛋白資源浪費的問題。

本發明通過以下技術方案實現上述發明目的：所述的一種利用內源酶制備藍蛤蛋白源ACE抑制肽的方法，包括以下步驟：

一種利用內源性蛋白酶制備藍蛤蛋白源ACE抑制肽的方法，包括新鮮藍蛤預處理、勻漿、內源酶激活、酶解、滅酶、脫腥、離心、冷凍干燥，其特征在于所述的內源酶激活是紫外線30W照射10-60分鐘；所述的酶解是調節藍蛤勻漿pH至4.0-11.0，并在酶解過程中不斷滴加堿以維持pH恒定，溫度至40-80℃條件下，利用新鮮藍蛤內源性蛋白酶進行酶解1-10小時；所述的滅酶是100℃維持10分鐘；所述脫腥是采用活性炭對酶解液進行吸附，加入占酶解液重量5％的活性炭不斷攪拌吸附30分鐘。

本發明所采用的ACE抑制活性的測定，具體步驟為：

取30μL馬尿酰組胺酰亮氨酸(HHL)底物液，加入10μL抑制劑混合均勻，在37℃±0.5℃恒溫水浴中預熱3-5分鐘，然后加入20μL血管緊張素轉化酶(ACE)液充分混合，37℃保溫30分鐘后，再加入60μL的1mol/LHC1終止反應，得到反應液。同時用10μL pH為8.3的硼酸緩沖液替代抑制劑溶液作為空白對照組。該反應液用0.45μm濾膜過濾后直接用HPLC系統進行分析。色譜條件：柱溫25℃，流速0.5mL/min，流動相乙腈/水(0.05％TFA)比例為25/75等度洗脫，檢測波長228nm。

ACE抑制活性計算公式如下：

ACE抑制活性(％)＝100(M-N)/M

式中：M為空白對照組中馬尿酸的峰面積。

N為添加抑制劑組中馬尿酸的峰面積。

本發明所提及的一種利用內源酶制備藍蛤蛋白源ACE抑制肽的方法，制備過程中不需要添加任何外源蛋白酶，充分利用藍蛤自身的內源性蛋白酶進行酶解，并且利用紫外線照射激活藍蛤內源性蛋白酶進而提高藍蛤蛋白自溶的效率。該方法操作便捷，容易控制，相對外源酶制備方法成本相對較低，適于工業化生產，而且獲得的藍蛤蛋白源ACE抑制肽產品更符合當今人們追求的天然、綠色、健康的保健理念。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明進一步闡述，但不限于此。

實施例1：