[發明專利]冬青素A在制備抗腫瘤藥物中的新應用

在審

• 申請號: 201510074138.0
• 申請日: 2015-02-11
• 公開（公告）號: CN104606201A
• 公開（公告）日: 2015-05-13
• 發明（設計）人: 孫云;王娟;劉暢
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: A61K31/56
• 分類號: A61K31/56;A61P35/00
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，尤其涉及冬青素A在制備多種抗惡性腫瘤藥物中的新用途。

背景技術

山綠茶(llexhainanensis?Merr)是提取自冬青科冬青屬植物海南冬青的葉(Johji?Yamahara等.Photochemistry,1987,26(7):2023-2027)。已有報道作為山綠茶的主要有效成分冬青素A具有很強的調血脂作用(Liu?Chang等.Organic&biomolecular?chemistry,2013,11:4993-9)。在先的中國專利申請(申請號201410146662X)公開了冬青素A在制備抗腫瘤藥物中的用途；但僅證明了在制備抗皮膚癌、肺癌及胃癌藥物中的應用，但是否有抑制其他腫瘤的活性，卻有待研究。本發明人系統地研究了冬青素A對多種實體瘤以及離體培養的人源腫瘤細胞的抑制作用，并首次發現冬青素A特別對肝癌Hepge2荷瘤小鼠實體瘤具有很強的抑制作用。

發明內容

本發明目的是提供冬青素A的新用途。

本發明提供了化合物冬青素A在制備肝癌、乳腺癌、腸癌、前列腺癌、食道癌、子宮癌等惡性腫瘤藥物中的新應用。

為了實現上述目的，本發明的技術方案如下：

本發明公開了冬青素A在制備體內外抑制肝癌生長藥物中的應用。所述體內外抑制肝癌生長是指體內抑制肝癌實體瘤增長或體外抑制肝癌細胞增殖。

本發明公開了冬青素A在制備體外抑制腫瘤細胞增殖藥物中的應用。所述體外抑制多種腫瘤細胞增殖是指對食管癌，結腸癌，前列腺癌，乳腺癌，宮頸癌，鼻咽癌、淋巴癌、腎癌、胰腺癌、膀胱癌或卵巢癌的癌細胞的增殖有抑制作用。

通過腫瘤細胞的離體培養實驗，檢測冬青素A抗多種腫瘤活性，再通過整體動物實驗驗證其抗實體瘤活性。體外細胞實驗篩選了冬青素A對肝癌細胞SMMC-7721，HepG2，Hep3B,乳腺癌MDA-MB-231，結腸癌HT-29、HCT-116，前列腺癌PC-3，宮頸癌Hela，食管癌TE-1，鼻咽癌CNE-1、淋巴癌A20、腎癌A498、胰腺癌SW1990、膀胱癌BIU-87、卵巢癌SKOV-3等多種腫瘤細胞的抑制作用。整體荷瘤實驗表明冬青素A對肝癌HepG2荷瘤小鼠實體瘤生長具有明顯抑制作用。

附圖說明

圖1是冬青素A對肝癌、乳腺癌、腸癌、前列腺癌、宮頸癌等腫瘤細胞的半數致死量IC50作用。

圖2是冬青素A對肝癌Hepge2荷瘤小鼠體重影響。

圖3是冬青素A對肝癌Hepge2荷瘤小鼠實體瘤的抑制作用。圖中：Iex?A代表冬青素A，與空白對照組比較，^#p＜0.05，^##p＜0.01，^###p＜0.001。

具體實施方式

具體實施例如下：

實施例1冬青素A對體外培養的多種腫瘤細胞的抑制作用

實驗方法(MTT法)：腫瘤細胞株(包括肝癌細胞SMMC-7721，HepG2，Hep3B,乳腺癌MDA-MB-231，結腸癌HT-29、HCT-116，前列腺癌PC-3，宮頸癌Hela，食管癌TE-1，鼻咽癌CNE-1、淋巴癌A20、腎癌A498、胰腺癌SW1990、膀胱癌BIU-87、卵巢癌SKOV-3)按照常規方法培養傳代，收集生長在對數生長期的細胞，經0.01％胰酶消化液消化，計數，每孔細胞液體積為100μl接種在96孔板中，5％CO₂培養箱內37℃培養12h。提取自山綠茶(購自廣西，經王強教授鑒定為冬青科植物Ilex?hainanensisMerr的干燥葉，標本存放于中國藥科大學中藥分析教研室，標本號為2008-1，2008-2)的活性成分化合物冬青素A設五個濃度梯度，每一濃度設六個復孔，于5％CO₂培養箱內37℃分別培養24，48，72h，加入10μl的5mg/ml?MTT。37℃孵育4h后，棄上清，加入100ml?DMSO溶解，酶標儀測吸光度值，公式擬合得IC50值。如圖1，實驗結果表明，冬青素A對肝癌、乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、宮頸癌、食管癌、鼻咽癌、淋巴癌、腎癌、胰腺癌、膀胱癌、卵巢癌等均有一定的抑制作用，并且72h作用更為明顯。

實施例2冬青素A對肝癌Hepge2荷瘤小鼠實體瘤生長的抑制作用。

藥物溶解：適量0.5％羧甲基纖維素鈉溶液(CMC-Na)將冬青素A溶解，稀釋至所需濃度供實驗用。

采用雄性SPF級C57BL/6J小鼠，體重20±2g，適應性喂養后，隨機分組。