[發(fā)明專利]抗p16單克隆抗體及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510073905.6
• 申請日: 2015-02-12
• 公開（公告）號: CN105001327B
• 公開（公告）日: 2019-01-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊清海;陳惠玲;王小亞
• 申請（專利權(quán)）人: 福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N15/13;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 福州市景弘專利代理事務(wù)所(普通合伙) 35219
• 代理人: 黃以琳

發(fā)明公開了一種抗p16單克隆抗體，抗p16單克隆抗體的重鏈可變區(qū)氨基酸序列由SEQ ID No.2所示的DNA序列所編碼，抗p16單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)氨基酸序列由SEQ ID No.3所示的DNA序列所編碼；所述抗p16單克隆抗體的重鏈可變區(qū)氨基酸序列為SEQ ID No.4所示的氨基酸序列，所述p16單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)氨基酸序列為SEQ ID No.5所示的氨基酸序列。本發(fā)明獲得的雜交瘤(30859?S17)分泌產(chǎn)生的單克隆抗體，能識別重組蛋白p16分子和表達p16的淋巴細胞，能夠檢測高表達p16蛋白的皮膚鱗狀細胞癌、胰腺癌、黑素瘤、淋巴瘤、食管癌、宮頸癌等多種腫瘤組織。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種可以識別人p16蛋白質(zhì)分子的單克隆抗體及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

p16分子定位于細胞核及細胞質(zhì)，能特異性的結(jié)合細胞分裂周期(Cell DivisionCycle)關(guān)鍵酶CDK4或CDK4與細胞周期素(Cyclin)的復(fù)合體，參與G1-S轉(zhuǎn)換的調(diào)控，抑制CDK4的活性，阻止細胞進入S期，對RB基因控制的細胞增殖周期中起負調(diào)節(jié)作用。一旦p16基因缺失、突變等導(dǎo)致功能缺失，則不能抑制CDK4，最終導(dǎo)致細胞進入惡性增殖，加速腫瘤發(fā)生。因為p16通過與cyclin D競爭結(jié)合CDK4、CDK6抑制cyclin D/CDK4的活性，當去除p16的抑制作用后，將使細胞異常增殖，過度激活周期蛋白和/或抑制蛋白的失活，都會導(dǎo)致CDKs的過度作用，導(dǎo)致細胞非正常增生。而一旦p16失活，則會引起細胞惡性增殖。細胞中，p16蛋白的表達通常受到另兩種抑癌蛋白：p53和RB的調(diào)控，處于低水平狀態(tài)。

研究表明，p16異常表達可用于各種腫瘤的研究，如卵巢癌(袁碧波，張士偉，孫保存，劉容珍，卵巢腫瘤p16蛋白的表達及意義，中國腫瘤臨床，2000，4(27)：265-267)、肺腺癌(陸金友，湯一珍，劉麗華，孟剛，肺腺癌組織p16蛋白表達與其預(yù)后的關(guān)系，安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1999,6(34)：452-454)、直腸癌(張遠,王小強,王金柱,白旭升，直腸癌p16蛋白表達的檢測及其意義，陜西腫瘤醫(yī)學(xué)，2001,6(9):105-107)、乳腺癌(崔素萍，王花麗，彭偉，劉海靜，侯琳，張波，乳腺癌組織p16異常表達的相關(guān)分析，北京大學(xué)學(xué)報，2012,5(44)：755-759)。目前研究表明p16在高級別宮頸上皮內(nèi)腫瘤和高危型HPV感染的腫瘤中高表達(齊朝陽，陳艷，曾鴻，高宇琳，郭紅梅，宮頸上皮內(nèi)腫瘤p16、p53、Ki67、p63的表達與HPV感染及其臨床意義，實用醫(yī)學(xué)雜志，2011,27(20):3639-3640)。p16蛋白分子量為16kDa左右，選擇不同的抗原進行免疫，制備出不同結(jié)合特性的抗體，對表達抗原細胞具有不同的識別能力和模式。鑒于p16分子在腫瘤病理研究中的重要性，已有不同的抗體制備用于不同免疫學(xué)方法。

公開號為CN 101446591A的發(fā)明專利“p16^INK4a雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒”，用p16^INK4a多克隆抗體包被酶標板、生物素標記的p16^INK4a單克隆抗體進行宮頸癌篩查。公開號為CN1201210197293的發(fā)明專利“一種檢測腫瘤標志物p16抗原表位氨基酸序列及應(yīng)用”也提供了一種腫瘤抑癌基因p16的抗原氨基酸序列，應(yīng)用該多肽抗原能檢測肺癌的食管癌患者血中相應(yīng)的特異性抗原表位。該抗原多肽及其抗體可用于制備腫瘤早期診斷試劑，開發(fā)腫瘤的靶向藥物。目前在腫瘤診斷中使用最多的p16抗體為克隆號E6H4抗體。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種可被廣泛應(yīng)用、可準確診斷各種腫瘤類型的抗p16單克隆抗體。

本發(fā)明的技術(shù)手段為：