[發(fā)明專利]一種提高漁用疫苗浸泡免疫效果的佐劑及其應(yīng)用方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510071454.2
• 申請(qǐng)日: 2015-02-11
• 公開（公告）號(hào): CN104667274B
• 公開（公告）日: 2017-05-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 任燕;吳淑勤;孫保興;石存斌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所;廣州市瑞洋表面活性劑有限公司
• 主分類號(hào): A61K39/39
• 分類號(hào): A61K39/39;A61P37/04
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司44205
• 代理人: 鄭瑩

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及漁用疫苗的施用途徑及應(yīng)用效果，具體是提高漁用疫苗浸泡免疫效果的佐劑及其應(yīng)用方法。

背景技術(shù)

我國(guó)是淡水養(yǎng)殖大國(guó)，集約化程度高，水產(chǎn)病害也較為嚴(yán)重。疫苗是預(yù)防疾病的有效手段，能刺激動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生抗體，可使魚類特異抵御病原的攻擊，在提高魚類特異性免疫水平的同時(shí)亦能增強(qiáng)機(jī)體抗不良應(yīng)激的能力，作為符合環(huán)境友好和可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略的病害防控措施，已成為國(guó)際現(xiàn)代水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)規(guī)范內(nèi)容之一。漁用疫苗在浸泡免疫過程中，細(xì)菌抗原需要克服魚類體表黏液、鱗片及皮膚的障礙，才能進(jìn)入機(jī)體，效果差。目前國(guó)內(nèi)商品化的漁用疫苗（嗜水氣單胞菌敗血癥滅活疫苗、草魚出血病活疫苗）均以注射免疫途徑為主。漁用疫苗注射投遞的免疫效果好，但成本高、勞動(dòng)強(qiáng)度大，適合工廠化養(yǎng)殖中應(yīng)用，不適合在我國(guó)池塘、網(wǎng)箱養(yǎng)殖魚中應(yīng)用，而浸泡免疫操作方便，尤其適用于小規(guī)格魚種在分塘、運(yùn)輸?shù)冗^程中免疫。如何提高鰓和皮膚對(duì)抗原的攝入量，是建立浸泡投遞技術(shù)的首要問題。利用免疫佐劑、細(xì)胞滲透劑等材料，結(jié)合高滲浸泡、超聲波處理等透皮方法，增強(qiáng)魚體對(duì)抗原的攝入量，從而提高免疫效果是浸泡免疫的發(fā)展方向和趨勢(shì)。基于此，開發(fā)應(yīng)用高效、安全、使用方便、環(huán)境友好的提高浸泡疫苗免疫效果的浸泡材料，可大大推動(dòng)漁用疫苗的應(yīng)用，進(jìn)而推動(dòng)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種提高漁用疫苗浸泡免疫效果的佐劑及其應(yīng)用方法。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

蓖麻油聚乙二醇單酯葡萄糖苷在制備漁用疫苗浸泡疫苗佐劑中的應(yīng)用。

一種漁用浸泡疫苗的佐劑，該佐劑由以下質(zhì)量份數(shù)的成分組成：1～20份蓖麻油聚乙二醇單酯葡萄糖苷、0～10份氮酮、0～30份山莨菪堿。

進(jìn)一步的，上述佐劑由以下質(zhì)量份數(shù)的成分組成：10份蓖麻油聚乙二醇單酯葡萄糖苷、5份氮酮、15份山莨菪堿。

進(jìn)一步的，上述蓖麻油聚乙二醇單酯葡萄糖苷的制備方法為：先將蓖麻油先經(jīng)濃硫酸酸化脫水，再與聚乙二醇400進(jìn)行酯化反應(yīng)生成蓖麻油聚乙二醇400單酯；蓖麻油聚乙二醇400單酯再與葡萄糖發(fā)生反應(yīng)被糖苷化，即得蓖麻油聚乙二醇單酯葡萄糖苷。

進(jìn)一步的，上述蓖麻油聚乙二醇單酯葡萄糖苷的制備方法具體包括以下步驟：

1）酸化：按重量將蓖麻油和濃硫酸按體積比10∶(0.5～1.5)的混勻，加熱至100～110℃時(shí)，用蓖麻油將下層溶液pH值調(diào)節(jié)至2～3，保溫反應(yīng)25～35min，停止加熱和攪拌，靜置0.5～1h，取上層的油中水反復(fù)洗滌至放出水液的pH值為4～5為止，然后攪拌加熱，在真空度為580~620mm/Hg下加熱至240~260℃維持25～35min，進(jìn)行脫水處理，使含水量降至萬(wàn)分之三以下，得脫水后的蓖麻油；

2）酯化：按重量計(jì)將上述脫水后的蓖麻油和聚乙二醇400按重量比（3.8～4.2）：（2.8～3.2）混勻，再加入重量聚乙二醇400與脫水后的蓖麻油兩者總重量的2%～5%的對(duì)甲苯磺酸，在攪拌下加熱至80~90℃，保溫反應(yīng)5.6～6.5h；然后取樣測(cè)定粗酯的酸值，依酸值加入過量碳酸鈉，在攪拌下升溫至100～120℃后反應(yīng)8~12min；獲得蓖麻油聚乙二醇400單酯；

3）糖苷化：將上述制得的蓖麻油聚乙二醇400單酯與一水葡萄糖按摩爾比1:1混勻，并加入路易斯酸作催化劑，在真空和氮?dú)獗Ｗo(hù)下于110～130℃反應(yīng)5.5～6.5h，反應(yīng)至溶液由渾濁變成淡黃色透明液體，即得到最終成品，即蓖麻油聚乙二醇單酯葡萄糖苷。

上述一種漁用浸泡疫苗佐劑的使用方法，該方法包括以下步驟：

1）將上述制備的漁用浸泡疫苗佐劑中加入水?dāng)嚢杌靹?，得到的溶液為浸泡免疫溶?；

2）將上述1）得到的浸泡佐劑溶液1與疫苗溶液按體積比1:（100~200）混合均勻，得到的混合溶液為浸泡免疫溶液2，其中漁用浸泡疫苗佐劑各組分的終濃度范圍分別為：蓖麻油聚乙二醇單酯葡萄糖苷1~20μg/mL、氮酮0~10μg/mL、山莨菪堿0~30μg/mL；

3）將需要免疫的魚體放入浸泡免疫溶液2中，充氣浸泡15~30min，即完成免疫。

本發(fā)明的有益效果是：