[發明專利]一種納米金復合材料免疫傳感器的制備方法及應用有效
| 申請號： | 201510071326.8 | 申請日： | 2015-02-11 |
| 公開（公告）號： | CN104634973A | 公開（公告）日： | 2015-05-20 |
| 發明（設計）人： | 渠鳳麗;趙巖 | 申請（專利權）人： | 曲阜師范大學 |
| 主分類號： | G01N33/574 | 分類號： | G01N33/574;G01N33/531 |
| 代理公司： | 濟南泉城專利商標事務所 37218 | 代理人： | 李桂存 |
| 地址： | 273165 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 納米 復合材料 免疫 傳感器 制備 方法 應用 | ||
1.一種納米金復合材料免疫傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）制備氨基化的Fe3O4納米磁珠
?將直徑為200～250nm的Fe3O4納米磁珠分散到水中，Fe3O4納米磁珠濃度為0.2～0.8mg/mL水，然后按濃度為0.1～0.4μL/mL水加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，混合均勻，于15～25℃攪拌3～12h，得到氨基化的Fe3O4納米磁珠；
（2）制備中空聚多巴胺-金納米材料
a）將直徑為200～250nm的Fe3O4納米磁珠加入到pH為8.5的Tris緩沖溶液中，配制成1.0～2.0mg/mL?Fe3O4納米磁珠的Tris分散液，然后加入多巴胺鹽酸鹽，Fe3O4納米磁珠與多巴胺鹽酸鹽的質量比為1:0.8～1.2，混合均勻，于15～25℃攪拌反應3～24h，磁分離，得Fe3O4-聚多巴胺納米顆粒；
b）將Fe3O4-聚多巴胺納米顆粒配制成濃度為0.05～0.1mg/mL的溶液，然后加入質量分數為1%的HAuCl4水溶液，Fe3O4-聚多巴胺與HAuCl4水溶液的體積比為150～250：1，混合均勻，于80～100℃攪拌反應20～40?min，磁分離，得Fe3O4-聚多巴胺-Au納米材料；
c）將Fe3O4-聚多巴胺-Au納米材料配制成濃度為1.5～2.5mg/mL的溶液，加入濃度為5.5～6.5mol/L的鹽酸水溶液1.5～2.5mL，于15～25℃攪拌反應5～8h，得中空聚多巴胺-納米金材料；
（3）制備免疫傳感器
a）將步驟（1）制備的氨基化的Fe3O4納米磁珠分散到pH為7.2的Tris緩沖溶液中，配制成濃度為0.5～2.0mg/mL的分散液，按分散液與戊二醛水溶液的體積比0.5～2.0：1加入濃度為2.5wt%的戊二醛水溶液，于15～25℃攪拌反應3～12h，得到功能化Fe3O4納米磁珠，將功能化Fe3O4納米磁珠磁分離后重新分散到pH為7.2的Tris緩沖溶液中，配制成濃度為0.5～1.5mg/mL的分散液，加入濃度為2μg/mL的癌癥標志物抗體，即一抗/Ab1，功能化Fe3O4納米磁珠分散液與一抗/Ab1的體積比為5～20：1，37℃下震蕩0.5～2h，隨后加入濃度為1wt%的BSA用以封閉非特異性結合位點，功能化Fe3O4納米磁珠分散液與加入的BSA的體積比為0.5～2：1，37℃下震蕩10～60min后磁分離，隨后加入pH為7.2的Tris緩沖溶液混合均勻，再次磁分離，將其重新分散到pH為7.2的Tris緩沖溶液中，配制成質量濃度為0.5～2.0mg/mL的分散液，然后向上述分散液中加入質量濃度為1mg/mL的NaBH3CN水溶液，加入的NaBH3CN水溶液與上述分散液的體積比為0.5～2：1，然后于37℃震蕩10～60min，得到Fe3O4-Ab1；
b）將上步得到的Fe3O4-Ab1分散到pH為7.2的Tris緩沖溶液中配制成濃度為0.5～1.5mg/mL的分散液，加入到從0?U/mL到100?U/mL的不同濃度的癌癥標志物的抗原中，其中Fe3O4-Ab1分散液與相對應的癌癥標志物的抗原的體積比為0.5～2：1，37℃震蕩10～60min，得到Fe3O4-Ab1-癌標；
c）將步驟（2）制得的中空聚多巴胺-納米金材料分散到pH為7.2的Tris緩沖溶液中配制成濃度為0.5～2.0mg/mL的中空聚多巴胺-納米金分散液，然后加入濃度為2μg/mL的癌癥標志物抗體，即二抗/Ab2,中空聚多巴胺-納米金分散液與二抗/Ab2的體積比為5～20：1，37℃下震蕩0.5～2h，隨后按中空聚多巴胺-納米金分散液與BSA的體積比為0.5～2：1加入濃度為1wt%的BSA用以封閉非特異性結合位點，37℃下震蕩10～60min，離心分離，將分離出的固體重新分散到pH為7.2的Tris緩沖溶液中，配制成濃度為0.5～2.0mg/mL的中空聚多巴胺-納米金溶液，然后按中空聚多巴胺-納米金分散液與Fe3O4-Ab1-癌標的體積比為0.5～2：1加入濃度為0.5～2.0mg/mL的Fe3O4-Ab1-癌標，于37℃下震蕩10～60min后磁分離，隨后加入10～20mLpH為7.2的Tris緩沖溶液混合均勻，再次磁分離，然后加入到對硝基苯酚和硼氫化鈉混合水溶液中，得混合溶液，通過對溶液中對硝基苯酚紫外-可見光譜吸收的變化，即可實現癌癥標志物抗原的檢測。
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