[發明專利]一種用于檢測胃泌素?17的試劑盒及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201510069296.7
• 申請日: 2015-02-10
• 公開（公告）號: CN104614536B
• 公開（公告）日: 2017-06-27
• 發明（設計）人: 饒微;孫普;李昀軒;劉望;楊雅麗;袁錦云;李婷華
• 申請（專利權）人: 深圳市新產業生物醫學工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/532;G01N21/76
• 代理公司: 北京聿宏知識產權代理有限公司11372
• 代理人: 鐘日紅,劉烽

技術領域

本發明涉及生物物質檢測的技術領域，具體涉及一種用于檢測胃泌素-17的試劑盒及其制備方法，以及應用該試劑盒檢測胃泌素-17的方法。

背景技術

胃泌素是一種重要胃腸激素，由存在于胃幽門部粘膜的G細胞(gastrin containing cell)分泌，然后進入血中再作用于胃，進而促進胃液分泌。G細胞主要分布在胃竇部，并在腎臟代謝，腎功能不全時血清胃泌素升高。胃的幽門竇受到食物等的機械性刺激，幽門部的pH偏堿性時就進行胃泌素的分泌。其結果是胃液、特別是鹽酸的分泌變得旺盛。當胃內部的pH降低時，鹽酸和胃泌素的分泌就停止。此外，胃泌素也具有促進胃蛋白酶、胰液、膽液、胰島素等分泌的作用，可是這些作用并不強。

由于胃泌素原的細胞轉譯成熟，竇中的G細胞在循環中開始釋放一些不同種類的、由酸刺激產生的胃泌素及其他前體的混合物質。這個混合物質由胃泌素-71、-52、-34、-17、-14、-6組成，其中在健康人血清/血漿中主要存在形式為胃泌素-34和胃泌素-17。胃泌素-17(G-17)是健康竇粘膜中最主要有效形式，基本完全由G細胞產出。胃泌素-17系由17個氨基酸殘基組成的多肽，有兩種：酪氨酸殘基上為硫酸基取代的和未被取代的(胃泌素Ⅰ和Ⅱ)，但是這兩種形式在生理活性上并沒有差異。僅在相當于C末端部分的四肽(Tyr-Met-Asp-Phe-NH₂)發現胃泌素的活性，稱為四肽胃泌素。對各種哺乳類動物的胃泌素的一級結構的研究表明，胃泌素-17均為17個氨基酸組成，僅從氨末端的第5位和第10位的氨基酸因動物而異。另外，所有12位的酪氨酸結合著-SO₃H是胃泌素-17的重要特征之一。

幽門螺桿菌感染繼發萎縮性胃炎的患者一般有著異常低的胃泌素-17水平，相對應地，其胃癌和消化性潰瘍疾病的風險增加到普通人的18倍和25倍。胃泌素-17在胃十二指腸潰瘍的發病機制中起到基本或重要的作用。對于這類患者，在基礎狀態下，血清胃泌素偏高，平均水平大約為160pg/ml，與正常范圍可有一定重疊；但在進食及其他刺激胃泌素分泌的情況下則明顯增高。高胃泌素是胃潰瘍的重要發病機制之一。另外，異常高的胃泌素-17水平可以視作胃酸缺乏癥的標志。胃泌素-17檢測也可以作為病人的術后監測指標，做過成功的胃竇切除手術后，胃泌素-17分泌水平基本接近于0。在胃泌素瘤即卓林格-艾里森(Zollinger-Ellison)綜合癥患者的血液中，胃泌素-17濃度偏高。胃泌素瘤是胰腺最常見的內分泌腫瘤，是胰島中分泌胃泌素的D細胞增生而發病，其分泌大量胃泌素，使壁細胞急劇增加。胃泌素瘤其次發生在胃和十二指腸。卓-艾綜合征具下列三聯癥：高胃泌素血癥，可高達l000pg/ml；高胃酸排出量，基礎胃酸＞15mmol/h，可達正常人的6倍；伴有反復發作的胃、十二指腸多處潰瘍，且多為難治性潰瘍，伴慢性腹瀉。

目前胃泌素-17的檢驗在臨床上使用越來越廣泛，市場上主要使用的檢測方法為酶聯免疫吸附試驗法(ELISA)。

酶聯免疫吸附試驗法是指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。主要檢測原理為免疫夾心法：其中一株胃泌素-17特異性捕捉抗體吸附于包板上，另一株檢測抗體則標記辣根過氧化物酶(HRP)。通過HRP連單抗與胃泌素-17結合到固相載體上，溫育清洗，后加入底物，HRP催化底物發生顯色反應，最終通過酶標儀測定其吸光度，從而計算樣本胃泌素-17的濃度。

酶聯免疫吸附試驗法檢測時間長，至少需要6個小時，甚至過夜反應才能完成測試；同時主要依靠純手工加樣等系列操作，效率低，容易導致實驗結果誤差大；由于酶促反應不夠徹底，且易受外部干擾因素影響，如溫度、時間及材料濃度影響，因此檢測時特異性低，靈敏度差。并且，酶聯免疫吸附試驗法的固相載體為固態，均勻涂布于酶標板反應孔內，在測試前需將待測樣本預稀釋，增加了實驗難度，進一步降低了試劑的靈敏度和準確性。

另外，目前市場上也有檢測胃泌素全片段的方法，主要為放射免疫分析法(RIA)、化學發光免疫分析法(CLIA)。雖然檢測胃泌素全片段能夠在檢測臨床胃泌素含量時防止漏檢，但是胃泌素成份過于復雜，并不是每一個成份都能用于臨床疾病的檢驗及診斷；并且在檢測胃泌素全片段時使用的多抗會嚴重降低試劑的特異性及靈敏度，造成檢測結果的不準確。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檢測胃泌素-17的試劑盒及其制備方法，利用胃泌素-17與胃泌素-17抗體的特異性結合，結合示蹤標記物的發光性能和磁球的磁性，該試劑盒能夠準確地測定樣本中的胃泌素-17含量。