[發明專利]4,4’?聯吡啶橋聯四核鉑配合物在制備抗端粒酶陰性腫瘤藥物中的應用

有效

• 申請號: 201510069157.4
• 申請日: 2015-02-09
• 公開（公告）號: CN104693244B
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 趙勇;鄭小輝;毛宗萬;夏立新
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C07F15/00
• 分類號: C07F15/00;A61P35/00
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司44100
• 代理人: 劉婉

技術領域

本發明屬于醫藥領域，具體涉及4,4’-聯吡啶橋聯四核鉑配合物在制備抗端粒酶陰性腫瘤藥物中的應用。

背景技術

端粒(telomere)是真核生物染色體末端的一種特殊結構，由重復單位的DNA及結合其上的蛋白質組成，其作用是保持染色體結構和功能的完整性。伴隨著細胞每一次分裂，端粒都會縮短一點。正常人類細胞的端粒縮短到一定程度后，細胞就會凋亡，從而失去分裂增殖能力。大約80％的癌細胞通過表達端粒酶(telomerase)維持端粒長度的穩定，獲得無限分裂的能力；另外大約20％的癌細胞不表達端粒酶(端粒酶陰性腫瘤細胞)，它們通過被稱為ALT(Alternative Lengthening of Telomeres)的旁路途徑機制延伸端粒，從而維持端粒長度。由于端粒酶在人類的正常組織細胞中不存在，它是特異的抗癌靶標。端粒酶陰性腫瘤的特征包括：占人體腫瘤細胞的20％左右；該腫瘤細胞缺乏(或檢查不到)端粒酶活性；該腫瘤細胞采用ALT(Alternative Lengthening of Telomeres)機制延伸端粒；該腫瘤細胞中富含環狀的端粒DNA(C-Circle DNA或T-Circle DNA)；在絕大部分的該腫瘤細胞中有可觀察到的APB(Associated Promyelocytic leukaemia Body)。

越來越多的研究表明，采用ALT機制的癌細胞具有更強的侵潤、轉移能力，目前對該類癌癥的治療成功率極低，急需開發針對ALT腫瘤的治療藥物及方法。另外，最新的研究表明，靶向端粒酶的藥物可以讓腫瘤細胞激活ALT機制，因此，抑制ALT機制也是以端粒酶為靶標的癌癥治療的內在需求和終極方案。

發明內容

本發明的目的是針對以上要解決的技術問題，提供一種能夠有效抑制端粒酶陰性腫瘤細胞增殖的途徑。

為此，本發明提供了以下式(I)的4,4’-聯吡啶橋聯四核鉑配合物在制備抗端粒酶陰性腫瘤藥物中的應用：

以上式(I)化合物為已知的，陰離子為硝酸根(NO₃^-)離子，具有極高的水溶性，熱穩定性良好。

根據本發明所述的應用，所述端粒酶陰性腫瘤為骨肉瘤。

根據本發明所述的應用，所述藥物含有藥學上可接受的載體或賦形劑。

實驗證明，式I化合物4,4’-聯吡啶橋聯四核鉑配合物對于多種端粒酶陰性腫瘤細胞，包括但不限于例如人骨肉瘤等，均有顯著抑制腫瘤細胞增殖的效用。

附圖說明

圖1為細胞增殖曲線。

圖2為β-半乳糖苷酶染色實驗結果。

圖3為流式細胞法檢測細胞凋亡的結果。

具體實施方式

下面結合具體實施例進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的應用范圍。

本實施例中，以人骨肉瘤為例說明式I化合物(4,4’-聯吡啶橋聯四核鉑配合物)在抑制端粒酶陰性腫瘤細胞增殖方面的效用，但應理解的是，雖然僅以人骨肉瘤為例說明其用于制備抗端粒酶陰性腫瘤的藥物的用途，但本發明所稱的“端粒酶陰性腫瘤”細胞指缺乏(或檢查不到)端粒酶活性、不表達端粒酶的腫瘤細胞，包括但不限于例如人骨肉瘤、膠質瘤等。實驗證明，式I化合物(4,4’-聯吡啶橋聯四核鉑配合物)對于多種端粒酶陰性腫瘤細胞，包括但不限于例如人骨肉瘤等，均有顯著抑制腫瘤細胞增殖的效用。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

肺纖維母(MRC-5，正常細胞)細胞株、人宮頸癌(HeLa、端粒酶陽性)細胞株、人骨肉瘤(U2OS和SAOS2、端粒酶陰性)細胞株購自中國典型物種保藏中心(CTCC)。

1.2 實驗方法

1)將MRC-5、HeLa、U2OS和SAOS2細胞分別接種于10cm²的細胞培養皿中，接種密度為1×10⁶/皿，等細胞6小時貼壁后，小心換掉培養基，加入10mL含有相應濃度式I化合物(4,4’-聯吡啶橋聯四核鉑配合物)的培養基或者等體積的含0.1％DMSO的培養基。該操作每隔2天重復一次。

2)增殖過程中，每次傳代時均需使用細胞計數器對每皿細胞進行計數，然后再從中取部分細胞重新接種，接種密度仍為1×10⁶/皿，直到培養皿中細胞總數<1×10⁶個無法接種為止。

3)取增殖結束的細胞分別進行β-半乳糖苷酶染色實驗以及流式細胞凋亡實驗。