[發(fā)明專利]一種基于普魯蘭多糖的負載藥物和基因的載體、及其制備方法和應用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201510066829.6
• 申請日: 2015-02-06
• 公開（公告）號: CN104651405A
• 公開（公告）日: 2015-05-27
• 發(fā)明（設計）人: 王靜云;王曉紅;陳麗麗;夏菁;王先武
• 申請（專利權）人: 大連理工大學
• 主分類號: C12N15/87
• 分類號: C12N15/87;C12N15/85;A61K47/36;A61K9/107;A61K48/00;A61K31/704;A61K31/4745;A61K31/337;A61P35/00;C08G81/00;C08B37/00
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 賈漢生;李馨

1.一種基于普魯蘭多糖的用于負載藥物或/和基因的載體，其特征在于：所述的載體以硬脂酸為疏水核心，以普魯蘭多糖和低分子量聚乙烯亞胺為親水外殼，該載體具有式Ⅰ或式Ⅱ的結構：

式Ⅰ中，m為5到24之間的整數(shù)，n為11到47之間的整數(shù)；式Ⅱ中，n為9到45之間的整數(shù)。

2.根據(jù)權利要求1所述的載體，其特征在于，所述的低分子量聚乙烯亞胺為支鏈型聚乙烯亞胺。

3.根據(jù)權利要求1所述的載體，其特征在于：所述的低分子量聚乙烯亞胺的重均分子量為500-2000Da，所述的普魯蘭多糖的平均分子量為30-200kDa，所述的硬脂酸接枝率為3-10％，所述的低分子量聚乙烯亞胺接枝率以含氮量表示：為5-12％。

4.如權利要求1-3的任一項所述的載體的制備方法，其特征在于，所述載體是將硬脂酸和低分子量聚乙烯亞胺分別通過酯化反應和酰胺化反應依次接枝到普魯蘭多糖的骨架上而制備得到的。

5.根據(jù)權利要求4所述的制備方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

(1)氮氣保護下，普魯蘭多糖中加入硬脂酸和4-二甲氨基吡啶和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸，在15-50℃下攪拌反應30-70h，收集產物，產物經透析純化、冷凍干燥，得到普魯蘭-硬脂酸接枝聚合物；反應溶劑為二甲基亞砜；

(2)氮氣保護下，步驟(1)得到的普魯蘭-硬脂酸接枝聚合物中加入琥珀酸酐和4-二甲氨基吡啶，在30-70℃下攪拌反應5-30h，收集產物，產物經透析純化、冷凍干燥，得到普魯蘭-硬脂酸-琥珀酸酐接枝聚合物；反應溶劑為二甲基亞砜；

(3)氮氣保護下，步驟(2)得到的普魯蘭-硬脂酸-琥珀酸酐接枝聚合物中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺，在2-8℃下攪拌活化2-8h，再加入低分子量聚乙烯亞胺，在15-50℃下攪拌反應10-30h，經透析純化、冷凍干燥，得到普魯蘭-硬脂酸-聚乙烯亞胺接枝聚合物；反應溶劑為磷酸鹽緩沖液；

其中：

步驟(1)中所述的普魯蘭多糖和硬脂酸的摩爾比為(1-5)：1-30：1，硬脂酸、4-二甲氨基吡啶和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽的摩爾比為1：(0.5-2)：(1-2.5)；

步驟(2)中所述的普魯蘭-硬脂酸接枝聚合物和琥珀酸酐的摩爾比為1：(1-3)，4-二甲氨基吡啶與琥珀酸酐的摩爾比為1：(4-12)。

步驟(3)中所述的普魯蘭-硬脂酸-琥珀酸酐接枝聚合物中羧基與支鏈型聚乙烯亞胺中氨基的摩爾比為1：(0.1-5)，普魯蘭-硬脂酸-琥珀酸酐接枝聚合物中羧基、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽和N-羥基琥珀酰亞胺的摩爾比為1：(0.1-3)：(0.1-3)。

6.一種藥物-基因-載體系統(tǒng)，包括載體和負載在所述載體上的疏水性抗癌藥物和基因物質，其中所述的載體為權利要求1-3的任一項所述的載體。

7.根據(jù)權利要求6所述的藥物-基因-載體系統(tǒng)，其特征在于，所述的疏水性抗癌藥物為阿霉素、紫杉醇、喜樹堿中的一種。

8.根據(jù)權利要求6所述的藥物-基因-載體系統(tǒng)，其特征在于，所述的基因物質為質粒DNA、染色體DNA、線粒體DNA中的一種。

9.根據(jù)權利要求6所述的藥物-基因-載體系統(tǒng)，其特征在于，所述的質粒DNA為pβGal、p53中的一種。

10.權利要求6-9的任一項所述的藥物-基因-載體系統(tǒng)的制備方法，包括如下步驟：

(1)將載體和疏水性藥物攪拌混合，經透析、冷凍干燥后得載體負載藥物系統(tǒng)；

(2)將所述載體負載藥物系統(tǒng)與基因物質混合后室溫孵育，得到藥物-基因-載體系統(tǒng)；

其中，疏水性藥物與載體的質量比為1：(5-30)；負載藥物系統(tǒng)與基因物質的質量比為(0.01-80)：1；所述孵育時間為20-60min。