[發明專利]一種抗神經母細胞瘤的中藥提取物及其制備工藝和應用

在審

• 申請號: 201510064460.5
• 申請日: 2015-02-09
• 公開（公告）號: CN104586950A
• 公開（公告）日: 2015-05-06
• 發明（設計）人: 李健
• 申請（專利權）人: 李健
• 主分類號: A61K36/63
• 分類號: A61K36/63;A61P35/00;A61K131/00
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明屬于中藥提取技術領域，具體而言，涉及一種抗神經母細胞瘤的中藥提取物及其制備工藝和應用。

背景技術

神經母細胞瘤(neuroblastoma，NB)又稱成神經母細胞瘤，是威脅兒童生命的兒童多見的惡性腫瘤之一，據文獻報告它是兒童惡性腫瘤中排列在急性白血病、腦瘤和惡性淋巴瘤之后發病率占第四位的腫瘤。NB屬交感神經系統腫瘤，系由未分化的交感神經細胞聽組成，具有高度惡性，近20余年來雖然在NB的生物學特性、診斷和治療上有較大進展，但死亡率仍高。目前，人們積極尋找抗神經母細胞瘤新藥，一方面從天然產物中提取新藥，另一方面探索改進已有藥物，增加新功能；中藥是我國的傳統藥物，其在治療疑難雜癥方面具有先天優勢。由于新藥開發難度大，周期長，對中藥的深入研究成為新的熱點。

桂花子為木犀科植物木犀的干燥果實。4～5月果實將成熟時采收，用溫水浸泡后，曬干。干燥果實呈長卵形或橢圓形，長1.5～2厘米，直徑7～9毫米；表面棕色或紫棕色，有隆起的不規則網狀皺紋；基部有果柄痕，有時可見細果柄及皿狀宿萼。外果皮菲薄，易脫落，露出淡黃棕色的果核，其表面具不規則的縱溝紋；內果皮帶韌性，易剝開，通常含種子1枚（另一胚珠一般不發育，偶有含種子2枚的）。種子呈長卵形，長1.2～1.5厘米，直徑約5毫米，灰棕色，有略凹下的棕色脈紋，腹面附有長卵形薄膜狀中隔；胚乳堅硬肥厚，黃白色，富油質，胚細長，微有香氣，種子味苦。以身干、子粒飽滿、色橙黃、不霉者佳。其含脂肪油，出油率達11.9％。

目前，尚無文獻報道桂花子或其提取物具有抗神經母細胞瘤的功效。

發明內容

本發明的目的在于對桂花子進行深入研究和探索，從而提供一種抗神經母細胞瘤的中藥提取物及其制備工藝和應用。

為了實現本發明的目的，發明人通過大量試驗研究并不懈探索，最終獲得了如下技術方案：

一種抗神經母細胞瘤的中藥提取物，所述的中藥提取物為桂花子提取物。它是在桂花子壓榨去油后得到的桂花子餅粕基礎上經水、乙酸乙酯先后提取獲得的。

本發明的第二個目的還在于提供了上述桂花子提取物的制備工藝，其中該工藝包括如下步驟：將桂花子壓榨去油后得到的桂花子餅粕加水煎煮，所得煎液過濾，濾液濃縮成稠膏后，于75℃以下干燥，得干燥物；加入乙酸乙酯，加熱回流提取，所得提取液過濾，然后減壓回收溶劑，于75℃以下干燥成干浸膏，粉碎，得到桂花子提取物。

優選地，如上所述的桂花子提取物的制備工藝，其中所述的煎煮步驟為：加水煎煮提取2-4次，每次煎煮0.8-2.2h。

本發明人通過將神經母細胞瘤細胞的體外培養，當神經母細胞瘤細胞的細胞狀態達到穩定以后，將所制備的桂花子提取物與神經母細胞瘤細胞共同培養，通過CCK-8法檢測桂花子提取物對神經母細胞瘤細胞增殖，通過對細胞增殖結果的分析以及細胞存活率與溶液濃度的關系，可以得到一個初步的結論：隨著桂花子提取物溶液劑量濃度的增加，細胞的存活率呈下降趨勢，當桂花子提取物濃度達到400μg/ml時，細胞增殖抑制率達到60%以上，這可以說明桂花子提取物對神經母細胞瘤細胞的增殖具有非常顯著的抑制作用。基于以上研究結果，本發明的第三個目的在于提供一種制藥用途，即上述的桂花子醇提物在制備抗神經母細胞瘤的藥物中的應用。

與現有技術相比，本發明涉及的中藥提取物由單一的中草藥制備而成，其不僅可以抑制人骨髓神經母細胞瘤細胞增殖，而且因其原料的來源廣泛，因此生產成本低，具有較好的社會意義和經濟意義。

具體實施方式

以下是本發明的具體實施例，對本發明的技術方案做進一步作描述，但是本發明的保護范圍并不限于這些實施例。凡是不背離本發明構思的改變或等同替代均包括在本發明的保護范圍之內。

實施例1?桂花子提取物的制備

將壓榨去油后得到的桂花子餅粕1.5kg，粉碎后置于帶有圓底燒瓶的多功能提取裝置中，加入12倍量的水，煮沸后保持沸騰，共煮沸3次，第1次保沸2小時，第2、3次各保沸1.5小時，合并3次提取液，過濾，濾液濃縮成稠膏后，于72℃干燥，得干燥物；在裝有所得干燥物的多功能提取裝置中加入10倍體積質量比的乙酸乙酯，加熱回流提取2次，每次提取2小時，合并提取液，過濾，然后減壓回收溶劑，于72℃以下干燥成干浸膏，粉碎成細粉，過100目篩，得到桂花子提取物。

實施例2?桂花子提取物對人骨髓神經母細胞瘤SH-SY5Y細胞增殖的抑制試驗研究