[發明專利]融合蛋白Nt4CL7aPcSTS的相關生物材料及其應用

有效

• 申請號: 201510062362.8
• 申請日: 2015-02-05
• 公開（公告）號: CN104630249B
• 公開（公告）日: 2017-11-28
• 發明（設計）人: 馬蘭青;郭輝力;趙曉萌;楊明峰;楊亞東;劉文彬;劉歡
• 申請（專利權）人: 北京農學院
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N9/10;C12N9/00;C12N15/70;C12N1/21;C12N15/81;C12N1/19;C12P7/22
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司11245
• 代理人: 關暢,任鳳華

技術領域

本發明涉及生物技術領域中融合蛋白Nt4CL7aPcSTS的相關生物材料及其應用。

背景技術

白藜蘆醇(Resveratrol，簡稱Res)，化學名為3，4'，5-三羥基-1，2-二苯乙烯(trans-3,4',5-trihydroxystilbene)，又稱芪三酚，是一種含有芪類結構的非黃酮類多酚化合物，分子量為228.2，不溶于水，溶于乙醇等有機溶劑。天然的白藜蘆醇在很多植物中存在，例如虎杖、花生和葡萄等。

白藜蘆醇是植物遭遇紫外線照射、機械損傷及真菌感染時急劇增加的一種植保素，研究顯示白藜蘆醇具有抗癌、保護心血管、抗氧化、抗衰老、免疫調節、神經保護和植物雌激素等作用，可廣泛地應用于醫藥、保健品、食品、化妝品等領域。白藜蘆醇是葡萄酒最重要的保健成分，法國人在高脂肪、高蛋白、高能量飲食習慣下，心血管疾病的發病率遠低于其他歐美國家，就得益于經常飲用含白藜蘆醇的紅葡萄酒。

白藜蘆醇來源于苯丙烷代謝途徑(Phenylpropanoid pathway)。其生物代謝途徑為：苯丙氨酸在苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia-lyase，PAL)作用下裂解成反式肉桂酸，肉桂酸在肉桂酸-4-羥基化酶(Cinnamate-4-hydroxylase，C4H)的催化作用下生成4-香豆酸，4-香豆酸在4-香豆酰輔酶A連接酶(4-Coumarate-CoA ligase，4CL)的作用下合成4-香豆酰輔酶A，最后，芪合酶(Stilbene synthase，STS)催化1分子的4-香豆酰輔酶A和3分子的丙二酰輔酶A生成白藜蘆醇(圖1)。

在生物體內白藜蘆醇生物合成途徑限速步驟較多，單純過量表達某一關鍵酶雖然對白藜蘆醇的含量可能會產生一定的促進作用，但由于其它步驟限制，白藜蘆醇的高水平積累非常困難。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是如何提高白藜蘆醇的產量。

為解決上述技術問題，本發明提供了融合蛋白Nt4CL7aPcSTS的相關生物材料。

本發明所提供的融合蛋白Nt4CL7aPcSTS的相關生物材料，為下述B1)至B20)中的任一種：

B1)編碼融合蛋白Nt4CL7aPcSTS的核酸分子；

B2)含有B1)所述核酸分子的表達盒；

B3)含有B1)所述核酸分子的重組載體；

B4)含有B2)所述表達盒的重組載體；

B5)含有B1)所述核酸分子的重組微生物；

B6)含有B2)所述表達盒的重組微生物；

B7)含有B3)所述重組載體的重組微生物；

B8)含有B4)所述重組載體的重組微生物；

B9)含有B1)所述核酸分子的轉基因植物細胞系；

B10)含有B2)所述表達盒的轉基因植物細胞系；

B11)含有B3)所述重組載體的轉基因植物細胞系；

B12)含有B4)所述重組載體的轉基因植物細胞系；

B13)含有B1)所述核酸分子的轉基因植物組織；

B14)含有B2)所述表達盒的轉基因植物組織；

B15)含有B3)所述重組載體的轉基因植物組織；

B16)含有B4)所述重組載體的轉基因植物組織；

B17)含有B1)所述核酸分子的轉基因植物器官；

B18)含有B2)所述表達盒的轉基因植物器官；

B19)含有B3)所述重組載體的轉基因植物器官；

B20)含有B4)所述重組載體的轉基因植物器官；

所述融合蛋白Nt4CL7aPcSTS是如下⑴或⑵的蛋白質：

⑴由Nt4CL蛋白和PcSTS蛋白融合得到的融合蛋白：

所述Nt4CL蛋白是如下a)或b)：

a)氨基酸序列是SEQ ID No.1第1-542位氨基酸殘基的蛋白質；

b)將a)經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由其衍生的蛋白質；

所述PcSTS蛋白是如下A或B：

A、氨基酸序列是SEQ ID No.1第550-937位氨基酸殘基所示的蛋白質；

B、將A經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由其衍生的蛋白質。

⑵將⑴的N端或C端連接標簽得到的帶標簽蛋白質。