[發明專利]獼猴桃種間雜交品種金艷的分子鑒定方法

有效

• 申請號: 201510062151.4
• 申請日: 2015-02-06
• 公開（公告）號: CN104611443A
• 公開（公告）日: 2015-05-13
• 發明（設計）人: 黃宏文;鐘彩虹;李大衛;劉義飛
• 申請（專利權）人: 中國科學院武漢植物園
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 黃瑞棠

技術領域

本發明涉及植物種間雜交品種的鑒定方法，尤其涉及一種獼猴桃種間雜交品種‘金艷’的分子鑒定方法。

背景技術

建立植物新品種鑒定和保護體系對保護育種者權益、促進植物品種創新、有效利用植物種質資源和促進農林產業發展具有重要意義。分子標記因其穩定、不受表型及環境變異影響，已成為新品種特異性、一致性及穩定性（即DUS測試）測試的重要手段。此外，分子標記解決了目前育種材料遺傳基礎日益狹窄及選育品種數目增多導致的品種差異趨同問題。利用AFLP和SSR標記等多種分子標記的方法，對油菜、玉米和水稻等多種作物成功地進行了DUS補充測試。在我國，玉米、水稻和大麥等作物的分子鑒定圖譜已經成為品種保護國家標準（如，2014年頒布的《大麥品種鑒定技術規程SSR分子標記法》）。單核苷酸多態性（SNP）標記作為第三代分子標記，目前已廣泛應用于遺傳多樣性分析、品種鑒定、遺傳連鎖圖譜構建和重要性狀的基因定位等相關研究中。特別是，最近SNP標記在冬、春大麥等品種測試中的成功運用，為獼猴桃等多倍體物種進行分子標記鑒定提供了有力示例。

我國獼猴桃產業和科研的發展已成為獼猴桃品種分子鑒定體系開發的強勁推動力。聯想控股現代農業板塊公司佳沃集團等大型企業介入農業，在產品的推介、品牌的創建等方面投入大量的資金，推動了我國果品的高端化和國際化；但與此同時，一批劣質及仿冒的品種和果品在市場流通，如何鑒定并保護新品種及其產品已成為國內企業及科研單位的重要任務。隨著獼猴桃分子生物學技術的發展，中華獼猴桃的參考基因組草圖（616.1Mb）和39040個基因序列已經被公布并得到注釋。這為我們開發獼猴桃品種鑒定的分子標記方法提供了科研基礎。

本發明選擇獼猴桃種間雜交品種‘金艷’為研究對象，擬開發出一套基于測序和生物信息學手段的鑒定獼猴桃種間雜交特征的分子鑒定方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種獼猴桃種間雜交品種‘金艷’的分子鑒定方法，適用于‘金艷’雜種特性的鑒定。

本發明的目的是這樣實現的：

本方法包括下列步驟：

①‘金艷’獼猴桃及其父母本即中華獼猴桃和毛花獼猴桃物種DNA的提取及全基因組序列測定；

②‘金艷’獼猴桃及其父母本物種基因組序列的過濾和質量控制；

③‘金艷’獼猴桃及其父母本物種全基因組比對到‘紅陽’獼猴桃參考基因組序列；

④‘金艷’獼猴桃與母本毛花獼猴桃和父本中華獼猴桃特有SNP發掘和檢測，證實‘金艷’含有大量毛花獼猴桃和中華獼猴桃的特異SNP位點，為兩者的種間雜交后代；

⑤‘金艷’種間雜交特征鑒定SNP位點的重驗證，證明此方法切實可行。

所述的‘金艷’是黃色耐貯藏的獼猴桃品種，由中國科學院武漢植物園選育；母本為毛花獼猴桃，父本為中華獼猴桃。該品種2010年通過國家品種審定（國S-SV-AE-019-2010）,目前是第一個商業化的獼猴桃種間雜交品種。

所述的‘紅陽’是紅色果肉的獼猴桃品種，由四川省自然資源研究所和蒼溪縣農業局共同選育，該品種的基因組已經被測定并正式公布在公共網站：http://bioinfo.bti.cornell.edu/kiwi。目前，‘紅陽’獼猴桃的基因組數據是其他獼猴桃物種和品種生物信息學分析的參照數據。

與現有技術相比，本發明具有下列優點和積極效果：

本發明開發出一種適用獼猴桃種間雜交品種的分子鑒定方法，經實驗證明此套分子鑒定方法具有重復性好、穩定性高的特點。本發明是第一個應用于獼猴桃種間雜交品種鑒定的方法，可推廣應用于其他類似獼猴桃種間雜交品種的分子鑒定。

附圖說明

圖1是利用引物1、2、3、4擴增的‘金艷’和母本毛花獼猴桃特異位點比對圖；

圖2是利用引物5?擴增的‘金艷’和父本中華獼猴桃特異位點比對圖。

具體實施方式

下面結合附圖和實施例詳細說明：

一、方法

①‘金艷’獼猴桃及其父母本即中華獼猴桃和毛花獼猴桃物種DNA的提取及全基因組序列測定

采用CTAB法提取‘金艷’及其父本中華獼猴桃、母本毛花獼猴桃的DNA，DNA經質量檢測合格后基于Illumina?HiSeq2000測序平臺，對所有的分析樣本構建600bp、500bp和180bp的小片段文庫，對樣本進行6.5×以上的基因組重測序分析，獲得‘金艷’及其父母本的基因組序列；

‘金艷’獼猴桃及其父母本物種基因組序列的過濾和質量控制