[發明專利]檢測葡萄灰皮諾病毒的RT-qPCR檢測試劑盒及寡核苷酸無效
| 申請號： | 201510059445.1 | 申請日： | 2015-02-04 |
| 公開（公告）號： | CN104611467A | 公開（公告）日： | 2015-05-13 |
| 發明（設計）人： | 鄧叢良;周琦;趙曉麗;邊勇;呂玉峰;張百怡 | 申請（專利權）人： | 中華人民共和國北京出入境檢驗檢疫局 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/94 |
| 代理公司： | 北京正理專利代理有限公司 11257 | 代理人： | 趙曉丹 |
| 地址： | 100026*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 檢測 葡萄灰 病毒 rt qpcr 試劑盒 寡核苷酸 | ||
1.一組檢測葡萄灰皮諾病毒的寡核苷酸，其特征在于，所述寡核苷酸如序列表SEQ?ID?No.1至序列表SEQ?ID?No.3所示；其中序列SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2分別為檢測葡萄灰皮諾病毒的正義引物和反義引物，序列SEQ?ID?No.3為檢測葡萄灰皮諾病毒的熒光探針。
2.根據權利要求1所述的檢測葡萄灰皮諾病毒的寡核苷酸，其特征在于，所述熒光探針序列SEQ?ID?No.3的5’端標記報告熒光基團FAM，3’端標記淬滅熒光基團BHQ1。
3.權利要求1或2所述的檢測葡萄灰皮諾病毒的寡核苷酸在制備檢測葡萄灰皮諾病毒試劑盒中的應用。
4.一種葡萄灰皮諾病毒的RT-qPCR檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括以下組分：
(1)RT-qPCR反應液，其包括：序列表SEQ?ID?No.1所示的正義引物，序列表SEQ?ID?No.2所示的反義引物，序列表SEQ?ID?No.3所示的熒光探針，所述熒光探針的5’端標記報告熒光基團FAM，3’端標記淬滅熒光基團BHQ1；
(2)陰性對照；
(3)陽性對照。
5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述RT-qPCR反應液還包括：含Mg2+的PCR緩沖液，dNTP混合物，反轉錄酶，RNA酶抑制劑，Taq?DNA聚合酶和DEPC水。
6.一種葡萄灰皮諾病毒的RT-qPCR檢測方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：
(1)提取樣品RNA；
(2)對提取的樣品RNA進行RT-qPCR擴增；其中，使用序列表SEQ?ID?No.1所示的正義引物，序列表SEQ?ID?No.2所示的反義引物，序列表SEQ?ID?No.3所示的熒光探針，所述熒光探針的5’端標記報告熒光基團FAM，3’端標記淬滅熒光基團BHQ1；
(3)根據RT-qPCR反應體系的熒光強度進行結果判定。
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