[發明專利]手掌參抗腫瘤提取物及其組合物的醫藥用途和制備方法

在審

• 申請號: 201510058748.1
• 申請日: 2015-02-04
• 公開（公告）號: CN104906371A
• 公開（公告）日: 2015-09-16
• 發明（設計）人: 熱娜·卡斯木;王金輝;黃健;李國玉;趙玉倩;王小青;馬慶東;張珂
• 申請（專利權）人: 新疆醫科大學
• 主分類號: A61K36/898
• 分類號: A61K36/898;A61P35/00
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標事務所 65105
• 代理人: 湯潔

技術領域

本發明屬醫藥技術領域，具體涉及一種維吾爾藥手掌參抗腫瘤提取物及其組合物的醫藥用途和制備方法以及它在制備預防及治療腦膠質瘤、肝癌、肺癌、胃癌、結腸癌、胰腺癌、乳腺癌、宮頸癌等惡性腫瘤藥物中的應用。

背景技術

手掌參拉丁名Gymnadenia?conopsea?(L.)?R.?Br.，又稱手參、掌參、手兒參、佛手參，為蘭科植物手參或粗脈手參的塊根。青藏高原稀有藥材，生長在海拔3000-4000米高山灌木叢中，因為外形像手掌而得名。生于海拔265-4700米的山坡林下、草地或礫石灘草叢中。干燥塊莖形如手掌，指狀分裂，通常4～6裂不等，稍扁，長2.5～3.5厘米，徑2～2.5厘米，表面皺縮，淡黃色，有時莖痕周圍有1褐色環。

手掌參的全草含揮發油6%，內有甲基香醛，向日葵素。塊根中含粘液質、淀粉、蛋白質、糖分、草酸鈣、無機鹽。性平味甘，止咳平喘；益腎健脾；理氣和血；止痛。治肺虛咳喘，虛勞消瘦，神經衰弱，久瀉，失血，帶下，乳少，慢性肝炎。手參地下莖的水提取物對兔、犬有利尿作用,但劑量過大反能降低尿量。對蛙下肢血管呈收縮作用，對小鼠的全身狀態則呈抑制作用。

本發明在深入地研究手掌參的抗癌活性時意外地發現，手掌參除了具有誘導白血病細胞凋亡的功效外，亦具有很好的腦膠質瘤、乳腺癌、宮頸癌、肝癌、肺癌、胃癌、結腸癌、胰腺癌等惡性腫瘤的預防及治療作用，該活性提取物及其組合物有望應用到多種癌癥的預防和治療上。

發明內容

本發明所解決的技術問題是提供一種手掌參提取物。

本發明還提供了以手掌參提取物為主要活性成分的組合物。

本發明同時提供了手掌參提取物及其組合物的制備和應用。

本發明是通過如下技術方案實現的：

維吾爾藥手掌參經水超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠（SiO₂）柱分離，上樣后的硅膠柱，用二氯甲烷-甲醇混合溶劑梯度洗脫（二氯甲烷-甲醇，比例見表1），各二氯甲烷-甲醇比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外抗腫瘤活性篩選體系測試其抗腫瘤活性，意外地發現先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇，100:0，體積比）洗脫，繼用二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇，100:1，體積比）洗脫，洗脫得到的二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇，100:1，體積比）洗脫液經回收有機溶劑，干燥，即為抗腫瘤活性提取物，而其他比例的洗脫組分，不具有抗腫瘤活性。特別地，優選為先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇，100:1，體積比）洗脫10倍柱體積，繼用二氯甲烷-甲醇混合溶劑（二氯甲烷-甲醇，100:1，體積比）洗脫15倍柱體積，洗脫液干燥后即為本發明抗腫瘤活性的提取物。抗腫瘤活性的提取物可以通過以上方法得到富集，從而與其他雜質類成分分離開。該抗腫瘤活性提取物從未見文獻報道，其薄層譜色譜（TLC）分析表征如圖1，TLC分析條件：GF₂₅₄硅膠板，展開系統：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（6:1:1）。顯色方法：香草醛濃硫酸顯色。

具體，發現過程如下：

1、手掌參經甲醇超聲提取物的制備

取維吾爾藥手掌參20?g，經100?ml水超聲提取15?min，提取液濃縮后，得提取物SN0215B??0.2076?g，二氯甲烷-甲醇系統洗脫。

2、二氯甲烷-甲醇混合溶劑梯度洗脫方法和結果

取維吾爾藥手掌參20?g，經100?ml水超聲提取15?min，提取液濃縮后，得提取物SN0215B??0.2076?g。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15?ml。上硅膠柱色譜，拌樣硅膠0.6g，空白硅膠5g，玻璃柱內徑1.5cm，二氯甲烷-甲醇系統梯度洗脫（條件見表1），柱體積11ml，每個梯度洗脫100?ml，得到，各個濃度提取洗脫液的洗脫物，回收溶劑，即得，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫提取物，TLC分析結果見圖2，，圖3。圖2的TLC分析條件：GF₂₅₄硅膠板，展開系統：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（6:1:1）。顯色方法：香草醛濃硫酸顯色。圖3的TLC分析條件：GF₂₅₄硅膠板，展開系統：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇（1:1:1）。顯色方法：香草醛濃硫酸顯色。

3、抗腫瘤活性篩選方法和結果

1）實驗條件

a)?細胞株信息

大鼠腦膠質瘤細胞株C6購于中國典型培養物保藏中心細胞庫。

b)?藥品及試劑