[發(fā)明專利]多刺綠絨蒿α?糖苷酶抑制活性提取物及其組合物的醫(yī)藥用途和制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510058737.3
• 申請(qǐng)日: 2015-02-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104644763B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王金輝;熱娜·卡斯木;李國(guó)玉;黃健;姚大紅;胡君萍;馬慶東;張珂;陳雪珊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新疆醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K36/66
• 分類號(hào): A61K36/66;A61P3/10;A61P3/04;A61P3/06
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標(biāo)事務(wù)所65105
• 代理人: 湯潔

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種多刺綠絨蒿α-糖苷酶抑制活性提取物及其組合物的制備方法以及它在降血糖、減肥、降血脂、治療糖尿病等方面的醫(yī)藥用途。

背景技術(shù)

多刺綠絨蒿Meconopsis horridula Hook.f. & Thoms.是 罌粟科綠絨篙屬一年生草本植物，高15-20厘米。全體被黃褐色或淡黃色堅(jiān)硬而平展的刺。主根肥而長(zhǎng)。莖近無(wú)或極短。葉均基生，披針形，長(zhǎng)5-12厘米，寬約1厘米，兩面被上述的刺;葉柄長(zhǎng)0.5-3厘米。6-8月開(kāi)花，花革堅(jiān)挺，常5-12條，密被黃褐色平展的刺。花單生于花葶頂，半下垂，直徑約2.5-4厘米，花瓣5-8，有時(shí)為4，藍(lán)色或藍(lán)紫色，寬倒卵形，長(zhǎng)1.2-2厘米，寬1厘米。蒴果倒卵形或橢圓狀長(zhǎng)圓形，長(zhǎng)1.2-2.5厘米，被上述的刺。生于海拔4100-5400米的山坡石縫中。分布于西藏、云南、四川、青海和甘肅。緬甸、印度東北部、不丹、錫金、尼泊爾也有。

多刺綠絨蒿，歸肝經(jīng)。苦，寒。有小毒。活血化瘀，鎮(zhèn)痛，燥濕，利咽。用于跌打損傷。本發(fā)明通過(guò)大規(guī)模、系統(tǒng)地活性篩選，意外地發(fā)現(xiàn)維吾爾藥多刺綠絨蒿提取物及其部分化學(xué)組分，具有顯著地α-糖苷酶抑制活性，該活性提取物及其組合物有望應(yīng)用于降血糖、減肥、降血脂、糖尿病等方面。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種多刺綠絨蒿提取物。

本發(fā)明還提供了以多刺綠絨蒿提取物為主要活性成分的組合物。

本發(fā)明同時(shí)提供了多刺綠絨蒿提取物及其組合物的制備和應(yīng)用。

本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

維吾爾藥多刺綠絨蒿經(jīng)甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠（SiO₂）柱分離，上樣后的硅膠柱，用氯仿-甲醇混合溶劑梯度洗脫（氯仿-甲醇，比例見(jiàn)表1），各氯仿-甲醇比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外篩選體系測(cè)試其α-糖苷酶抑制活性，意外地發(fā)現(xiàn)先用氯仿-甲醇混合溶劑（氯仿-甲醇，100:2，體積比）洗脫，繼用氯仿-甲醇混合溶劑（氯仿-甲醇，100:5，體積比）洗脫得到的氯仿-甲醇混合溶劑（氯仿-甲醇，100:5，體積比）洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為α-糖苷酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脫部位，沒(méi)有α-糖苷酶抑制活性的作用。特別地，以上條件最優(yōu)為先用氯仿-甲醇混合溶劑（氯仿-甲醇，100:2，體積比）洗脫10倍柱體積，繼用氯仿-甲醇混合溶劑（氯仿-甲醇，100:5，體積比）洗脫20倍柱體積，洗脫液干燥后所得提取物為本發(fā)明α-糖苷酶抑制活性的提取物。α-糖苷酶抑制活性的提取物可以通過(guò)以上方法得到富集，從而與其他雜質(zhì)類成分分離開(kāi)。該多刺綠絨蒿α-糖苷酶抑制活性提取物從未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，其薄層譜色譜（TLC）分析表征如圖1。TLC分析條件：GF254硅膠板，展開(kāi)系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（6:1:1）顯色方法：香草醛-硫酸顯色。

1、多刺綠絨蒿經(jīng)甲醇超聲提取物的制備

取維吾爾藥多刺綠絨蒿20 g，經(jīng)100 mL溶劑超聲提取15 min，提取液濃縮后，得提取物SN0033，樣品2.9012 g，留樣0.1424g，上樣量2.7588g，拌樣硅膠3 g，空白硅膠15 g，氯仿-甲醇系統(tǒng)洗脫。

2、石油醚-乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫方法和結(jié)果

取維吾爾藥多刺綠絨蒿20 g，經(jīng)100 mL溶劑超聲提取15 min，提取液濃縮后，得提取物SN0033，樣品2.9012 g，留樣0.1424g，上樣量2.7588g，上柱，甲醇溶解，共用甲醇15 mL。上硅膠柱色譜，拌樣硅膠3 g，空白硅膠15 g，玻璃柱內(nèi)徑2.0 cm，氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫（條件見(jiàn)表1），柱體積33 mL，每個(gè)梯度洗脫300mL，得到，各個(gè)濃度提取洗脫液的洗脫物，回收溶劑，即得，氯仿：甲醇梯度洗脫提取物，TLC分析結(jié)果見(jiàn)圖2。

表1

3、抑制α-糖苷酶活性篩選方法和結(jié)果

1)實(shí)驗(yàn)條件

a、材料：DMSO(二甲基亞砜) (科密歐公司)；KH₂PO₄、K₂HPO₄·3H₂O(廣東汕頭市西隴化工廠)；α-glucosidase酶(美國(guó)Sigma公司)；PNPG(美國(guó)Sigma公司)

b、實(shí)驗(yàn)儀器：多功能酶標(biāo)儀Bio-Rad Model 680型(Bio-Rad Laboratories Inc.)

2)實(shí)驗(yàn)方法和過(guò)程