[發明專利]一種抗黑果枸杞病理真菌的生物肥的制備方法

有效

• 申請號: 201510057945.1
• 申請日: 2015-02-04
• 公開（公告）號: CN104628434B
• 公開（公告）日: 2018-01-02
• 發明（設計）人: 徐薇薇;胡慧雯;吳淵;阮暉;梁瑩;許麗珍;吳孔華;莫建平;史金昕波;繆丹;俞雨;吳盛彬;徐騰洋
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C05F17/00
• 分類號: C05F17/00;C05G3/00
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司33224
• 代理人: 陳升華

技術領域

本發明涉及生物防治肥的制備領域，具體涉及一種抗黑果枸杞病理真菌的生物肥的制備方法。

背景技術

黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr)屬于茄科枸杞屬，為多棘刺灌木，多分枝，枝條堅硬，常呈之字形彎曲，白色，分布于中國西北和歐洲中亞。黑果枸杞味甘、性平，富含蛋白質、枸杞多糖、氨基酸、維生素、礦物質、微量元素等多種營養成分，特別是含有豐富的黑果色素——天然原花青素(OPC)，其OPC含量超過藍莓(黑果枸杞含OPC 3690mg/100g；藍莓含OPC330～3380mg/100g)，是迄今為止發現的OPC含量最高的天然野生植物。原花青素OPC是最有效的天然水溶性自由基清除劑，其功效是VC的20倍、VE的50倍，屬天然的水溶性花色甙黃酮類。黑果枸杞被收載于《四部醫典》、《晶珠本草》等藏藥經典著作中，被譽為“軟黃金”。

危害黑果枸杞主要病害有黑果病、根腐病等病理性真菌。植物病理真菌主要存在于土壤中，在植物生長中感染植物，引起植物病害、造成生產損失。因此，要從生物防治的角度消除植物真菌病害，殺滅或抑制土壤中的病理真菌至關重要，而使用具有生物防治功效的生物肥是實現這一目的的有效途徑。在各種生物肥中，長久以來我國應用的都是無芽孢菌類。但是無芽孢菌抗逆性低，對于干燥高溫的抵抗能力差，所以當制成液體或者吸附劑時穩定性不高。生物肥發展的新趨勢應是大力發展抗逆性高、能夠長期穩定生存的芽孢桿菌。特別是芽孢桿菌能夠產生多種抗真菌物質，對植物病原菌有顯著抑制作用，并且對人畜無害，也不會污染環境，將在防治植物真菌病害中起重要作用。

芽孢桿菌形態上呈直或者近直的桿狀，好氧或者兼性厭氧，革蘭氏陽性，在特定環境條件下能產生抗逆性內生孢子。芽孢桿菌在植物中廣泛定殖，被認為是公認的食品級安全微生物(generally regarded as safety,GRAS)。枯草芽抱桿菌是一種典型的芽孢桿菌，產生抗菌蛋白、多肽類物質、脂類物質及beta葡聚糖酶等抗菌物質，特別是beta葡聚糖酶等水解酶類與其抗植物病理真菌能力有密切關系，因為真菌細胞壁的組成是葡聚糖。

發明內容

本發明提供了一種抗黑果枸杞病理真菌的生物肥的制備方法，通過將產beta葡聚糖酶的枯草芽孢桿菌(CICC 10339)融入黑果枸杞天然菌群中，制成能夠通過生物防治途徑有效抑制殺滅黑果枸杞病理真菌的生物肥(即抗黑果枸杞病理真菌的生物肥)。

一種抗黑果枸杞病理真菌的生物肥的方法，包括以下步驟：

1)將枯草芽孢桿菌(CICC 10339)進行培養，制成密度10⁹～10¹⁰cfu/mL的高密度菌懸液；

2)將黑果枸杞健康枝條剪成小段進行堆肥，堆肥過程中噴施步驟1)中的高密度菌懸液，堆肥結束后進行發酵，經發酵后得到抗黑果枸杞病理真菌的生物肥。

本發明中，將黑果枸杞健康枝條剪成小節堆肥，使所制備生物肥中的菌群即為健康黑果枸杞植株本身天然菌群，此菌群與黑果枸杞植株協同進化生長，形成了互益共生體系，對病害真菌有一定生物防治作用。進一步地，將能夠產beta葡聚糖酶的枯草芽孢桿菌(CICC 10339)加入堆肥中，顯著加強對黑果枸杞病害真菌的生物防治作用。枯草芽孢桿菌(CICC 10339)由于產beta葡聚糖酶，對黑果枸杞植株纖維有良好分解作用，為堆肥發酵過程所必須，故能夠充分融入到堆肥菌群中穩定持久地增殖。如同乳酸菌對于動物的益生作用，抑制殺滅植物病理真菌的微生物可以稱之為植物益生菌。本發明所制備生物肥中，枯草芽孢桿菌(CICC 10339)即是黑果枸杞益生菌，對黑果枸杞病理真菌有顯著生物防治作用。

步驟1)中，枯草芽孢桿菌(CICC 10339)采用現有技術，來自中國工業微生物菌種保藏管理中心(CICC)，地址：北京市朝陽區酒仙橋中路24號院6號樓；保藏日期為2007年，菌種保持編號為10339。枯草芽孢桿菌(CICC 10339)可以向中國工業微生物菌種保藏管理中心購買。

將枯草芽孢桿菌(CICC 10339)進行培養，包括：枯草芽孢桿菌(CICC 10339)的出發密度為10⁶～10⁷個/mL，接種至液體培養基中接種量為1％～5％，33℃～39℃振蕩培養20～28h，至菌液密度為10⁹～10¹⁰cfu/mL的高密度菌懸液。