[發明專利]一種基于分子識別的熒光檢測葉酸的方法

有效

• 申請號: 201510056592.3
• 申請日: 2015-02-04
• 公開（公告）號: CN104897627B
• 公開（公告）日: 2017-07-11
• 發明（設計）人: 葛炳強;楊利軍;陳忠秀
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司33100
• 代理人: 范琪美,徐關壽

1.一種基于分子識別的熒光檢測葉酸的方法，包括步驟：

1)合成識別分子：將乳清酸與1,12-二氨基十二烷水溶液混合，常溫攪拌反應80～100小時得到混合液，將所述混合液除去水分得到濃縮產物，將所述濃縮產物用無水乙醇洗滌，真空干燥后得到1,12-二乳清酸基十二烷基二胺鹽(DDO)，其反應方程式如下：

其特征在于還包括以下步驟:

2)配制標準液：稱取磷酸二氫鈉和氫氧化鈉溶于水，用鹽酸調節其pH值為7.0～7.8，得到磷酸緩沖溶液；稱取葉酸溶解于磷酸緩沖溶液中，得到葉酸標準溶液；稱取DDO溶解于磷酸緩沖溶液中，得到DDO標準溶液；

3)測定三維熒光光譜特定條件：葉酸激發光波長為400nm，發射光波長為460nm；DDO激發光波長為320nm，發射光波長為390nm；

4)測定熒光強度：在DDO濃度為4.0×10^-4mol/L，激發光波長為320nm，發射光波長為390nm，激發電壓為800V，激發光源透過孔徑均為5.0nm，發射光源透過孔徑均為5.0nm的條件下，改變葉酸的濃度，測定不同葉酸濃度下DDO溶液的熒光強度；

5)得出線性方程：根據步驟4)得出DDO溶液的熒光強度與葉酸的濃度間具有線性關系，線性方程為F＝3116.99-28.4759cp，其中F為DDO溶液的熒光強度，cp為葉酸的濃度，相關系數γ為0.9959，檢出限為1.25×10^-6mol/L；

6)取1mL葉酸標準液，依步驟3)的方法測定熒光值，計算出葉酸的濃度。

2.根據權利要求1所述的一種基于分子識別的熒光檢測葉酸的方法，其特征在于：所述步驟1)中乳清酸與1,12-二氨基十二烷的摩爾比為2:1。

3.根據權利要求1所述的一種基于分子識別的熒光檢測葉酸的方法，其特征在于：所述步驟1)中反應時間為95～98小時。

4.根據權利要求1所述的一種基于分子識別的熒光檢測葉酸的方法，其特征在于：所述步驟2)中DDO的溶解為常溫下利用超聲振蕩儀超聲溶解。