[發明專利]hsa?miR?1280在非小細胞肺癌中的作用及其應用

有效

• 申請號: 201510055487.8
• 申請日: 2015-02-03
• 公開（公告）號: CN104726454B
• 公開（公告）日: 2017-07-28
• 發明（設計）人: 戴利成;許麗敏;李麗琴
• 申請（專利權）人: 湖州市中心醫院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/68
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙)11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明涉及miRNA在癌癥診斷中的應用，以及其用作非小細胞肺癌的診斷用途。

背景技術

肺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其發病率和死亡率均位于惡性腫瘤之首。非小細胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC)約占其80％，近些年療效雖有提高，但長期生存率仍較偏低，絕大多數患者確診時已是癌癥晚期，只能采取姑息性治療，預后較差。

侵襲和轉移是癌細胞從原發性部位轉移到遠端部位形成腫瘤的過程，它是一個多步驟、多因素參與的復雜生物學過程，是導致NSCLC復發和影響預后的重要因素，也是導致患者死亡的主要原因，目前對NSCLC的侵襲和轉移機制尚不清楚。一直以為腫瘤的發生是由一系列致癌基因和抑癌基因突變逐步形成的，但隨著非編碼RNA的發現，此傳統觀念被改變。最近的研究表明，非編碼RNA中的成員microRNA分子廣泛參與了腫瘤侵襲和轉移過程中的基因表達調控，這一發現為腫瘤轉移的診斷和治療提供了新的思路。

microRNA是由內源基因編碼，長約19-24nt的非編碼小RNA，可通過形成RNA誘導沉默復合體(RNA induced silencing complex,RISC)與靶基因3’端非翻譯區(untranslated region,UTR)互補結合，誘導mRNA的切割降解，翻譯抑制或其他形式的調節機制抑制靶基因的表達。目前已發現的人類microRNA已達1000多種，超過50％的microRNA基因定位于腫瘤相關的染色體座位或其易感位點，并證實部分microRNA異常表達與特定的腫瘤有著密切的關系，并參與了惡性腫瘤發展的多個過程，包括細胞分化、增殖、侵襲和轉移。

microRNA在NSCLC的侵襲和轉移中起至關重要的作用。Grawford等將miRNA-126轉染入肺鱗癌細胞系，與空白對照組及轉染入無序pre-microRNA的細胞相比，前者細胞的侵襲和轉移能力下降。Yu等將高危險性(死亡危險比>1)的microRNA前體和保護性(死亡危險比<1)的microRNA前體分別轉染入低侵襲性和高侵襲性的肺癌細胞系中，發現轉入高危險性microRNA的肺癌細胞系滲入基質膠膜的侵襲性增強，而轉染保護性microRNA的肺癌細胞系侵襲性降低，表明這些microRNA與肺癌的侵襲轉移相關。Zhang等利用莖環狀反轉錄實時PCR方法(stem-loop qRT-PCR)對20對NSCLC和癌旁組織的miR-21進行了定量，并利用western blot技術檢測了miR-21的靶基因PTEN的表達情況，發現miR-21在NSCLC中有較高的表達，而抑癌基因PTEN的蛋白表達情況則相反，接著將載有miR-21轉錄抑制子的質粒轉染NSCLC細胞，結果顯著降低了細胞的生長和侵襲作用，表明miR-21的表達降低了抑癌基因PTEN的表達，促進了NSCLC細胞的生長和侵襲。Zhu等的研究也發現，miR-21通過靶向多個腫瘤轉移抑制基因，調控乳腺癌、肺癌的侵襲和轉移。Wang等用microRNA芯片技術篩選出了在肺癌和癌旁兩種細胞中有顯著表達差異的miR-183，并發現miR-183與肺癌細胞的轉移潛能負相關，推測其為潛在的轉移抑制因子，進一步的研究發現，miR-183的過表達抑制了肺癌細胞的轉移和侵襲。

microRNA的研究不僅為腫瘤發生發展機制的探明提供了新的思路和方法，而且在臨床診療和預后評估方面顯示了很高的應用價值。microRNA參與了腫瘤發生發展的各個階段，每一個階段都有相應的microRNA發生變化。而且，microRNA具有很好的組織特異性，經篩查檢測48個microRNA確定腫瘤的組織來源準確率達90％。同時，microRNA又具有腫瘤發生的階段特異性，同一種腫瘤在發生發展不同分期階段具有不同的microRNA表達譜。因此，microRNA可以作為一種有效的腫瘤標志物用于癌癥的早期診斷、惡性分級、個性化診療和預后判斷等，甚至可以作為腫瘤治療的靶點，指導臨床用藥。